突然想起了那位小球藻老哥。躺平吧的一代传奇。
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(1)琼脂平板扩培
琼脂平板易于栽培,配置成斜面则可以进行保存。对于自然环境中提取的微藻,亦可以使用平板划线法分离藻群,此乃通用性较强的方法。
(GF-800C) 浓缩液配方
原料 | 用量 (400mL) | 备注 |
尿素 | 10g | 可采用KNO3 NaNO3(需计算总氮) |
MgSO4 7H2O | 3g | 七水 |
K2HPO4 | 3g | 磷酸氢二钾 易混淆 |
KH2PO4 | 7g | 磷酸二氢钾 常见化肥 |
将上述原材料用蒸馏水定容至400mL。
取浓缩液10mL,稀释至1L,加入1.5%至3%的琼脂粉(视琼脂强度而定),煮沸。若要制作异养培养基,加入5-20g葡萄糖,121°C蒸汽灭菌20分钟,倒入平板中。
注:由于添加了糖类,异养过程中液体培养基容易染菌。对于琼脂平板而言,可以使用高压蒸汽灭菌等生物实验方法灭除培养基内的杂菌。但在有曝气需求的中小型液体扩培装置中,其很难保证内外环境的隔离,从而使得小球藻遭受污染;因此在生产环境中大多使用自养模式(而且葡萄糖很贵啊喂)。
涂布平板,用parafilm(平替:医用透气胶带)封口。光照条件3000-8000lux,50%光暗比(自然光照也行,避免阳光暴晒),等待三天后采收藻种。
(2)液体培养基扩培
采收后,用接种环挑出单个藻落(购买的商业藻种一般较纯,虽然不保证无菌,但是品种一致性好),接种至100mL液体培养基中,配方同上。有条件的使用摇床,避免沉积;待藻类再次富集时,可转移至更大型的容器内。对于1L的锥形瓶,可以使用简易隔膜泵进行曝气。
(取50mL藻种(左),加入900mL培养基(右))
(室内自然光照,曝气与光照同步,五天后)
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小球藻既可以进行自养栽培(CO2作为碳源,光合作用),也可以进行异养栽培(利用外来碳源 - 例如单糖)。规模化培育设备一般采用管式光生物反应器,流动水池等等;在实验室中一般采用锥形瓶作为培养容器。
采用的微藻培养基配方如下:
名称 | 用量 (g/L) | 备注 |
葡萄糖 | 20 | 食品级 |
KNO3 | 1.5 | 化肥级 |
KH2PO4 | 1.5 | 化肥级 |
小球藻采用网购鱼塘级冻干粉,用蒸馏水稀释至1%后避光保存。
取100mL培养基倒入锥形瓶,微波灭菌,待冷却至室温后加入1mL小球藻稀释液。
最左边这瓶有5%的小球藻稀释液,所以看起来比较绿。其他三瓶都是标准的1%;
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[修改于 2年9个月前 - 2022/03/30 18:38:15]
制作了一批固态培养基,配方同上,只是加入了2%的琼脂。
据这篇专利所述,应该要等待几天才能长成菌落(藻落?)
引用GiroPetrenko发表于7楼的内容好像冻干粉是没法扩培的。。。
大概冻干粉是死细胞,只是拿来喂鱼的
新的小球藻到了,先涂个平板。上一批的平板(毫无意外地)什么也没有。
左边三瓶是昨晚制作的,右边三瓶是三天前培育的,好像的确绿一些(?)
取最绿的一瓶(从左往右数第四)涂片;10x物镜,未染色。
五天前涂布的平板,已经长出了大肠杆菌,看来是没法用了。
(家庭条件下灭菌是个难题)
2022/03/27: 更新了一部分教程。
我拿-80保的藻划的TAP平板,27℃,24/0光周期,光照40%,培养了4d,没有藻落长出来,同时划的蓝细菌(BG11板子)也没长出来,这咋回事啊,求教大神
大佬,请教下,液体培养基部分900ML是浓缩液900ML?还是取10ML浓缩液稀释到1L后的900ML稀释液?
请问渔业用的小球藻/螺旋藻粉末是活菌吗?能不能用作种子?
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