看見有朋友對微生物實驗有興趣, 後生因為在工作上的關係,有些淺薄的經驗可以分享一下,不過才疏學淺, 錯漏百出, 而且恐有中英傳譯之誤, 望各前輩多多指正,感激萬分!  以下一切資料除個別引用外,皆為筆者跟據所學,及工作上的經驗,2者融會的分享,如需要正規指引,請參照以下書目:

"AOAC INTERNATIONAL (OMA),Official Methods of Analysis "


這次先分享最最最基本的技巧, Aseptic technique (無菌操作)

微生物實驗上, 所謂--無菌--; 其實是指除了操作者需要培植的微生物外, 不容許有機會讓其他微生物污染培養基,營養液,稀釋用水什至是所有用具,空氣,工作桌及自己! 大前提是假設所有未消毒的--東西--都已被微生物污染(儘管已經完成一般清潔). 無菌操作一直廣泛地應用於一切需要微生物安全的實驗和操作, 除微生物學實驗,化驗的工作外, 醫院外科手術,接生,中醫針炙等醫療程序也會應用到無菌操作.沒有採取無菌操作的微生物學實驗,結論是公認100%不可信的.


跟據外國維基百科上的定義:
Aseptic technique is the name given to the procedures used by microbiologists to prevent microbial contamination of themselves, which may result in infection, contamination of the environment they are working in (e.g. fomites), and contamination of the specimen they are working on, which is especially important when a pure culture is desired. It is used whenever specimens are to be transferred between media, for example, when subculturing.
中文:
無菌操作是指微生物學家用來防止:
1. 微生物污染自己(可能會因此而做成感染),
2. 污染你工作的環境
3. 污染你工作的樣本. 尢其是在進行純種培植時
4. 在移植及接種過程中引致額外污染


操作上常用的殺菌方法如下:
1. 火焰:本生燈,酒精燈等,用來消毒小工具,器皿開口及工作範圍的空氣等
2. 高壓爐: 一個用超高溫水蒸氣來殺死一切微生物的工具,包括最難對付的真菌枹子或是細菌的內枹子
3. 酒精,消毒液消毒皂: 消毒小工具,雙手,桌面等
4. 紫外光燈: 消毒透明用具好像是塑膠培養皿,樣本袋等

現實上,我們會用以下的常用方法來消滅或避免不想要的微生物污染:

1. 工作時穿上整潔的白袍,有需要時帶上消毒手套(不是普通的外科手套,消毒手套是密封在已消毒的包裝中)及口罩

2. 開始工作前,每項工作後以及離開前, 都應先把自己雙手及桌面消毒, 雙手可以用殺菌皂液及水洗, 也可以和桌面一樣用75%酒精噴灑~ 雙手在噴曬後可以讓它自然揮發, 桌面就需要用乾淨的紙巾刷乾.

3. 需要與樣本直接接觸的所有用具,比如:燒杯,樽子,玻璃移液管等(鑷子,接種用的鉑絲和小剪刀除外),以及準備好的培養基,營養液,稀釋用水,需用高壓消毒鍋,在121攝氏度的水蒸汽中消毒15-30分鐘(視乎需要,一般是用15分鐘,用完的菌種,廢物等就需要1小時-2小時)

4. 樣本需要用已用高壓鍋消毒的有蓋樽子,有蓋試管或是在出廠前已預先消毒的樣品塑料袋或者均質機用袋密封好, 純菌種在製備時也需要用無菌操作.

5. 用完即棄的用具,例如塑膠培養皿,塑膠移液管等,買回來時已經預先消好毒的了, 未用之前不要打開包裝,打開之後需盡快用完,未用完的把開口對摺2次之後用膠貼封好

6. 正式開始工作之前先再用75%酒精清潔雙手和桌面,揮發完之後就可以點燃酒精爐或者本生燈,形成一個ASEPTIC ZONE(無菌圈), 火焰熱力所到之處(距離火焰方圓20cm3的地方)的空氣都已經被火焰消毒了~所有需要無菌操作的實驗步驟都要在這範圍裡進行.

7. 實驗中需要用到接種用的鉑絲時,用前需要用火焰把鉑絲先加熱到紅熱, 之後在無菌圈中慢慢冷卻數秒,再沾上菌群落,或者純菌種營養液中, 再移種到已消毒好(第3點)的培養基,營養液或稀釋用水中.之後鉑絲要再次燒至紅熱,冷卻後放回原位,下次再用時重複步驟

8. 除打開培養皿外, 打開其他有蓋器皿前,無論內容物有菌與否,也需要先用火焰微微灼燒器皿的開口(把試管,樽子等在火焰正上方打開蓋子,把管口水平地在火焰上快速地略過一下), 用完蓋回蓋子之前也要先灼一下

9. 每次打開蓋子除了必須進行"8."之外,需盡快蓋回蓋子,並保持在無菌圈來進行

10.剪刀和鑷子在用前先用75%酒精泡著,用時提起把多餘酒精滴在酒精容器內,之後在火焰上把最後的酒精燒掉,但不能燒紅~

11. 用完的器具,比如說移液管, 用完掉棄在消毒液中泡著, 完成工作後收集,用高壓爐消毒後掉棄或是洗淨循環再用

12. 所有已消毒的用品或藥劑一旦掉到地上,或是與操作者的手,身體;桌面有直接接觸,或是懷疑已被污染,必須再次清潔之後無菌消毒,才可以再用.

13. 一切有被微生物污染危險的物品,在未被殺菌消毒前,不得帶離實驗室.

14. 用完的樣本,純菌種,如沒有儲存的必要,當作含菌廢物處理(高壓爐消毒才掉棄)

總括來說..是一大堆嚴密的步驟,來把所有有機會的污染減少或是避免..在家中要實行起來不容易(微生物學實驗從不應該在家中做)..喜歡看圖的朋友們..對不起了~要下星期3才可以拍,到時後補給大家!

好久沒有發這麼長的貼了~錯字百出!大家見諒!