首先要制备大肠杆菌的感受态细胞，以便于接收外源基因。
所谓感受态细胞是通过一定的试剂处理细胞，使细胞处于易于接受外源DNA的生理状态。通常用0.1M CaCl2处理细胞，就可得到感受态细胞。细胞原本所处的生理状态制备对感受态细胞的制备很关键。将重组DNA导入细胞的方法有多种，入热休克法，电击法等。通过这些方法可以使细胞膜出现暂时的松弛，导致外源 DNA进入细胞。本实验中使用了热击法转化。

材料
    LB液体培养基培养XXXXli TG1至OD600约为0.4.
    0.1M CaCl2（含10%甘油）
    氨苄青霉素(100mg/mL)
    阿拉伯糖
    LB固体培养基
仪器
    冷冻离心机
    无菌操作台
    微量移液器
    水浴锅
    
方法
感受态的制备与转化
①取菌液1.5mL，8000rpm×1min离心，弃上清（尽量除尽，下同）。
②加入600μL预冷的0.1M CaCl2溶液，悬浮沉淀，4℃离心4000rpm×1min，弃上清。
③加入400μL预冷的0.1M CaCl2溶液，4℃离心4000rpm×1min，弃上清。
④加入200μL预冷的0.1M CaCl2溶液，冰浴20min，4℃离心4000rpm×1min，弃上清。
⑤加入100μL预冷的0.1M CaCl2溶液，4℃冰箱放置。
至此制成感受态。

摇床上培养到OD600=0.48的XXXXli TG1

超净台准备

离心

涡旋震荡。只有第一次加氯化钙时可以， 后期不行，因为感受态细胞结构不完整，极易因为震荡操作裂解。

丢入冰箱备用
  


接下来就是外源基因的转化。
我使用的含有GFP基因的质粒，是实验前人构建的。图谱没有找到，十分遗憾，知道的只有含有氨苄抗性，阿拉伯糖操纵子下连接GFP基因。
质粒溶液含DNA 4400ng/μL,本次实验使用1μg进行转化，故取用0.227μL质粒溶液。
取制备好的感受态细胞，分别向其中加入质粒，冰浴10min，42℃热激90s，冰浴3min，加入800μL LB液体培养基，37℃复苏20min，取100μL涂布于GFP平板上，37℃倒置培养20h。
设置对照
转化        空LB    Amp    Ala    Amp+Ala      
未转化     空LB    Amp    Ala    Amp+Ala

结果

转化                  空LB            Amp         Ala                Amp+Ala  
菌落数            无法计数         11         无法计数              12

未转化               空LB            Amp        Ala                 Amp+Ala
菌落数            无法计数          0         无法计数               0  

转化组
Amp

Amp+Ala

紫外下
  Amp

可以看到少许荧光，但是不如下面的。说明GFP在无阿拉伯糖诱导下，仍有一些本底表达。
Amp+ala


未转化组
Amp 无菌落
  
Amp+ala 无菌落



本实验转化率=12 cfu/μg DNA

您的回复让人不明其意

XXXXli导入的是绿色荧光蛋白。它只能在紫外下发出绿光。所以采用紫外照的，但是不能长时间照。。。
转化的质粒上有氨苄青霉素抗性基因，由于培养基氨苄的存在，使得质粒得以保持存在。

这个只是随便玩过几下。我记得其中的几种红色警告，一是侧链过于紧密，二是有结构空洞（可能与功能域有关）。
如果你将其拉成一个长线状，那么这两种情况自然不会出现。但是却缺失了大量的三维结构域，当然分数要比有警告时低。

至于分数高的构象能否合成，我不敢回答。

可以肯定的是我国当前所有的棉花都是转苏云金芽孢杆菌毒蛋白的。大部分的大豆是转基因的，不过提取脂肪酸的步骤不会涉及DNA，RNA的。大部分的番茄是转基因的，以提高保质期，貌似三腔的都是转基因的。

这个简单在这里回答说不清楚，你可以参看翟中和第四版的《细胞生物学》，有详细的机制介绍

其实对于职业进行分子生物学工作的人。这个实验的内容只不过是皮毛中的皮毛。。。
现在的分子生物学的发展简直是快的难以想象。。。

前段时间，看到一篇天津大学的文章。内容是检测人体内的植物源小RNA，结果发现，人类体内中已含有了大量的与水稻micro RNA同源的DNA 片段。
并不仅仅是转基因的才会导致人类什么问题，正常的饮食摄取的肉，植物，同样会。这是人类与植物共同进化与适应的过程。

LS提到的文章。
Exogenous plant MIR168a specifically targets mammalian LDLRAP1 evidence of cross-kingdom regulation by microRNA

Abstract
    Our previous studies have demonstrated that stable microRNAs (miRNAs) in mammalian serum and plasma are actively secreted from tissues and cells and can serve as a novel class of biomarkers for diseases, and act as signaling molecules in intercellular communication. Here, we report the surprising finding that exogenous plant miRNAs are present in the sera and tissues of various animals and that these exogenous plant miRNAs are primarily acquired orally, through food intake. MIR168a is abundant in rice and is one of the most highly enriched exogenous plant miRNAs in the sera of Chinese subjects. Functional studies in vitro and in vivo demonstrated that MIR168a could bind to the human/mouse low-density lipoprotein receptor adapter protein 1 (LDLRAP1) mRNA, inhibit LDLRAP1 expression in liver, and consequently decrease LDL removal from mouse plasma. These findings demonstrate that exogenous plant miRNAs in food can regulate the expression of target genes in mammals.
Exogenous plant MIR168a specifically targets mammalian LDLRAP1 evidence of cross.pdf 3.05MB PDF 228次下载 预览

荧光就是受控的。GFP基因是在阿拉伯糖操纵子下的。没有阿拉伯糖，GFP基因仅能维持较低的本底表达。几乎可以说没荧光。