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染色法、培养基和试剂 转
1 主题内容与适用范围
本标准规定了各种染色法、培养基和试剂。
本标准适用于食品和食物中毒样品中各类微生物的检验。
2 染色液配制及染色法
2.1 美蓝染色法
2.1.1 吕氏碱性美蓝染色液
美蓝 0.3g
95%乙醇 30mL
0.01%氢氧化钾溶液 100mL
将美蓝溶解于乙醇中，然后与氢氧化钾溶液混合。
2.1.2 染色法
将涂片在火焰上固定，待冷。滴加染液，染1～3min，水洗，待干，镜检。
2.1.3 结果
菌体呈蓝色。
2.2 革兰氏染色法
2.2.1 结晶紫染色液
结晶紫 1g
95%乙醇 20mL
1%草酸铵水溶液 80mL
将结晶紫溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。
2.2.2 革兰氏碘液
碘 1g
碘化钾 2g
蒸馏水 300mL
将碘与碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水至300mL。
2.2.3 沙黄复染液
沙黄 0.25g
95%乙醇 10mL
蒸馏水 90mL
将沙黄溶解于乙醇中，然后用蒸馏水稀释。
2.2.4 染色法
2.2.4.1 将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染1min，水洗。
2.2.4.2 滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗。
2.2.4.3 滴加95%乙醇脱色，约30s；或将乙醇滴满整个涂片，立即倾去，再用乙醇滴满整个涂片，脱色10s。
2.2.4.4 水洗，滴加复染液，复染1min。水洗，待干，镜检。
2.2.5 结果
革兰氏阳性菌呈紫色。革兰氏阴性菌呈红色。
注：亦可用1：10稀释石炭酸复红染色液作复染液，复染时间仅需10s。
2.3 耐酸性染色法(萎－倪二氏法)
2.3.1 石炭酸品红染色液
碱性品红 0.3g
95%乙醇 10mL
5%酚水溶液 90mL
将品红溶解于乙醇中，然后与酚溶液混合。
2.3.2 3%盐酸－乙醇
浓盐酸 3mL
95%乙醇 97mL
2.3.3 复染液
吕氏碱性美蓝染色液。
2.3.4 染色法
2.3.4.1 将涂片在火焰上加热固定，滴加石炭酸品红染色液，徐徐加热至有蒸气出现，但切不可使沸腾。染液如因蒸发减少时，应随时添加。染5min，倾去染液，水洗。
2.3.4.2 滴加盐酸－乙醇脱色，直至无红色脱落为止(所需时间视涂片厚薄而定，一般为1～3min)，水洗。
2.3.4.3 滴加吕氏碱性美蓝染色液，复染30s～1min，水洗，待干，镜检。
2.3.5 结果：耐酸性细菌呈红色，其他细菌、细胞等物质呈蓝色。
2.4 柯氏染色法
2.4.1 染色液
2.4.1.1 0.5%沙黄液。
2.4.1.2 0.5%孔雀绿液。
2.4.2 染色法
2.4.2.1 将涂片在火焰上固定，滴加0.5%沙黄液，并加热至出现气泡，约2～3min，水洗。
2.4.2.2 滴加0.5%孔雀绿液，复染40～50s。水洗，待干，镜检。
2.4.3 结果
布氏杆菌呈红色，其他细菌及细胞呈绿色。
2.5 奥尔特氏荚膜染色法
2.5.1 染色液
沙黄 3g
蒸馏水 100mL
用乳钵研磨溶解。
2.5.2 染色法
将涂片在火焰上固定，滴加染色液，并加热至产生蒸气后，继续染3min。水洗，待干，镜检。
2.5.3 结果
炭疽芽胞杆菌菌体呈赤褐色，荚膜呈黄色。
2.6 瑞氏染色法
2.6.1 染色液
瑞氏色素 0.1g
甲醇 60mL
用乳钵研磨溶解。
2.6.2 染色法
2.6.2.1 涂片待自然干燥后，滴加染色液，固定1min。
2.6.2.2 加入等量蒸馏水(pH6.5)，染色3～5min。
2.6.2.3 用蒸馏水冲洗，待干，镜检。
2.7 鞭毛染色法
2.7.1 染色液的配制
2.7.1.1 甲液：称丹宁酸5g、氯化高铁(FeCl3)1.5g，溶于100mL蒸馏水中，待溶解后加入1%的氢氧化钠溶液1mL和15%的甲醛溶液2mL。
2.7.1.2 乙液：称2g硝酸银溶于100mL蒸馏水中。
在90mL乙液中滴加浓氢氧化铵溶液，到出现沉淀后，再滴加使其变为澄清，然后用其余10mL乙液小心滴加至澄清液中，至出现轻微雾状为止(此为关键性操作，应特别小心)。滴加氢氧化铵和用剩余乙液回滴时，要边滴边充分摇荡，染液当天配，当天使用，2～3d基本无效。
2.7.2 染色法
在风干的载玻片上滴加甲液，4～6min后，用蒸馏水轻轻冲净。再加乙液，缓缓加热至冒汽，维持约半分钟(加热时注意勿使出现干燥面)。在菌体多的部位可呈深褐色到黑色，停止加热，用水冲净，干后镜检，菌体及鞭毛为深褐色到黑色。
2.8 碱性复红染色法
将0.5g碱性复红染料溶解于20mL95%乙醇中，然后用蒸馏水稀释至100mL。如有不溶物时，可用滤纸过滤，或静置后取上清液备用。
注：本染色液系用于苏云金芽胞内蛋白质毒素结晶的染色，藉以与蜡样芽胞杆菌相区别。
3 生化试验培养基和试剂
3.1 Hugh－Leifson培养基(O/F试验用)
3.1.1 成分
蛋白胨 2g
氯化钠 5g
磷酸氢二钾 0.3g
琼脂 4g
葡萄糖 10g
0.2%溴麝香草酚蓝溶液 12mL
蒸馏水 1000mL
pH7.2
3.1.2 制法
将蛋白胨和盐类加水溶解后，校正pH至7.2。加入葡萄糖、琼脂煮沸，溶化琼脂，然后加入指示剂。混匀后，分装试管，121℃高压灭菌15min，直立凝固备用。
3.1.3 试验方法
从斜面上挑取小量培养物作穿刺接种，同时接种两支培养基，其中一支于接种后滴加溶化的1%琼脂液于表面，高度约1cm，于36±1℃培养。
3.1.4 结果
3.2 糖发酵管
3.2.1 成分
?∨Ｈ飧唷 ?g
蛋白胨 10g
氯化钠 3g
磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O) 2g
0.2%滇麝香草酚蓝溶液 12mL
蒸馏水 1000mL
pH7.4
3.2.2 制法
3.2.2.1 葡萄糖发酵管按上述成分配好后，按0.5%加入葡萄糖，分装于有一个倒置小管的小试管内，121℃高压灭菌15min。
3.2.2.2 其他各种糖发酵管可按上述成分配好后，分装每瓶100mL，121℃高压灭菌15min。另将各种糖类分别配好10%溶液，同时高压灭菌。将5mL糖溶液加入于100mL培养基内，以无菌操作分装小试管。
注：蔗糖不纯，加热后会自行水解者，应采用过滤法除菌。
3.2.3 试验方法：从琼脂斜面上挑取小量培养物接种，于36±1℃培养，一般观察2～3d。迟缓反应需观察14～30d。
3.3 ONPG培养基
3.3.1 成分
邻硝基酚β－D-半乳糖昔(ONPG) 60mg
(O－Nitrophenyl－β－D－galactopyranoside)
0.01mol/L磷酸钠缓冲液(pH7.5) 10mL
1%蛋白胨水(PH7.5) 30mL
3.3.2 制法
将ONPG溶于缓冲液内，加入蛋白胨水，以过滤法除菌，分装于10mm×75mm试管，每管0.5mL，用橡皮塞塞紧。
3.3.3 试验方法
自琼脂斜面上挑取培养物1满环接种，于36±1℃培养1～3h和24h观察结果。如果β－半乳糖苷酶产生，则于1～3h变黄色，如无此酶则24h不变色。
3.4 缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR和VP试验用)
3.4.1 成分
磷酸氢二钾 5g
多胨 7g
葡萄糖 5g
蒸馏水 1000mL
pH7.0
3.4.2 制法
溶化后校正pH，分装试管，每管1mL，121℃高压灭菌15min。
3.4.3甲基红(MR)试验
自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中，于36±1℃培养2～5d，哈夫尼亚菌则应在22～25℃培养。滴加甲基红试剂一滴，立即观察结果。鲜红色为阳性，黄色为阴性。甲基红试剂配法：10mg甲基红溶于30mL95%乙醇中，然后加入20mL蒸馏水。
3.4.4 V－P试验
用琼脂培养物接种本培养基中，于36±1℃培养2～4d。哈夫尼亚菌则应在22～25℃培养。加入6%α－萘酚－乙醇溶液0.5mL和40%氢氧化钾溶液0.2mL，充分振摇试管，观察结果。阳性反应立刻或于数分钟内出现红色，如为阴性，应放在36±1℃下培养4h再进行观察。
3.5 西蒙氏柠檬酸盐培养基
3.5.1 成分
氯化钠 5g
硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.2g
磷酸二氢铵 1g
磷酸氢二钾 1g
柠檬酸钠 5g
琼脂 20g
蒸馏水 1000mL
0.2%溴麝香草酚蓝溶液 40mL
pH6.8
3.5.2 制法
先将盐类溶解于水内，校正pH，再加琼脂，加热溶化。然后加入指示剂，混合均匀后分装试管，121℃高压灭菌15min。放成斜面。
3.5.3 试验方法
挑取少量琼脂培养物接种，于36±1℃培养4d，每天观察结果。阳性者斜面上有菌落生长，培养基从绿色转为蓝色。
3.6 克氏拧檬酸盐培养基
3.6.1 成分
柠檬酸钠 3g
葡萄糖 0.2g
酵母浸膏 0.5g
单盐酸半胱氨酸 0.1g
磷酸二氢钾 1g
氯化钠 5g
0.2%酚红溶液 6mL
琼脂 15g
蒸馏水 1000mL
3.6.2 制法
加热溶解，分装试管，121℃高压灭菌15min。放成斜面。
3.6.3 试验方法
用琼脂培养物接种整个斜面，在36±1℃培养7d，每天观察结果。阳性者培养基变为红色。
3.7 丙二酸钠培养基
3.7.1 成分
酵母浸膏 1g
硫酸铵 2g
磷酸氢二钾 0.6g
磷酸二氢钾 0.4g
氯化钠 2g
丙二酸钠 3g
0.2%溴麝香草酚蓝溶液 12mL
蒸馏水 1000mL
pH6.8
3.7.2 制法
先将酵母浸膏和盐类溶解于水，校正pH后再加入指示剂，分装试管，121℃高压灭菌15min。
3.7.3 试验方法
用新鲜的琼脂培养物接种，于36±1℃培养48h，观察结果。阳性者由绿色变为蓝色。
3.8 葡葡糖铵培养基
3.8.1 成分
氯化钠 5g
硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.2g
磷酸二氢铵 1g
磷酸氢二钾 1g
葡萄糖 2g
琼脂 20g
蒸馏水 1000mL
0.2%溴麝香草酚蓝溶液 40mL
pH6.8
3.8.2 制法
先将盐类和糖溶解于水内，校正pH，再加琼脂，加热溶化，然后加入指示剂，混合均匀后分装试管，121℃高压灭菌15min，放成斜面。
3.8.3 试验方法
用接种针轻轻触及培养物的表面，在盐水管内做成极稀的悬液，肉眼观察不见混浊，以每一接种环内含菌数在20～100之间为宜。将接种环灭菌后挑取菌液接种，同时再以同法接种普通斜面一支作为对照。于36±1℃培养24h。阳性者葡萄糖铵斜面上有正常大小的菌落生长；阴性者不生长，但在对照培养基上生长良好。如在葡萄糖铵斜面生长极微小的菌落可视为阴性结果。
注：容器使用前应用清洁液浸泡。再用清水、蒸馏水冲洗干净，并用新棉花做成棉塞，干热灭菌后使用。如果操作时不注意，有杂质污染时，易造成假阳性的结果。
3.9 马尿酸钠培养基
3.9.1 成分
马尿酸钠 1g
肉浸液 100mL
3.9.2 制法
将马尿酸钠溶解于肉浸液内，分装于小试管内，并于管壁画一横线。以标志管内液面高度，高压灭菌121℃20min。
3.9.3 试剂
三氯化铁(FeCl3·6H2O)12g，溶于2%盐酸溶液100mL中即成。
3.9.4 试验方法
用纯培养物接种，于42℃培养48h，观察培养液是否到达试管壁上记号处，如不足时，用蒸馏水补足至原量。经离心沉淀，吸取上清液0.8mL，加入三氯化铁试剂0.2mL，立即混合均匀，经10～15min，观察结果。
3.9.5 结果：出现恒久之沉淀物为阳性。
3.10 营养明胶
3.10.1 成分
蛋白胨 5g
牛肉膏 3g
明胶 120g
蒸馏水 1000mL
pH6.8～7.0
3.10.2 制法
加热溶解、校正至pH7.4～7.6，分装小管，121℃高压灭菌10min，取出后迅速冷却，使其凝固。复查最终pH应为6.8～7.0。
3.10.3 试验方法
用琼脂培养物穿刺接种，放在22～25℃培养，每天观察结果，记录液化时间。或放在36士1℃培养，每天取出，放冰箱内30min后再观察结果。
3.11 苯丙氨酸培养基
3.11.1 成分
酵母浸膏 3g
DI－苯丙氨酸(或L－苯丙氨酸1g) 2g
磷酸氢二钠 1g
氯化钠 5g
琼脂 12g
蒸馏水 1000mL
3.11.2 制法
加热溶解后分装试管，121℃高压灭菌15min，使成斜面。
3.11.3 试验方法
自琼脂斜面上挑取大量培养物，移种于苯丙氨酸琼脂，在36±1℃培养4h或18～24h。滴加10%三氯化铁溶液2～3滴，自斜面培养物上流下，苯丙氨酸脱氨酶阳性者呈深绿色。
3.12 氨基酸脱羧酶试验培养基
3.12.1 成分
蛋白胨 5g
酵母浸膏 3g
葡萄糖 1g
蒸馏水 1000mL
1.6%滇甲酚紫－乙醇溶液 1mL
L－氨基酸或DL－氨基酸 0.5或1g/100mL
pH6.8
3.12.2 制法
除氨基酸以外的成分加热溶解后，分装每瓶100mL，分别加入各种氨基酸：赖氨酸、精氨酸和鸟氨酸。L－氨基酸按0.5%加入，DL－氨基酸按1%加入。再行校正pH至6.8。对照培养基不加氨基酸。分装于灭菌的小试管内，每管0.5mL，上面滴加一层液体石蜡，115℃高压灭菌10min。
3.12.3 试验方法
从琼脂斜面上挑取培养物接种，于36±1℃培养18～24h，观察结果。氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱，培养基应呈紫色。阴性者无碱性产物，但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色。对照管应为黄色。
3.13 蛋白胨水(靛基质试验用)
3.13.1 成分
蛋白胨(或胰蛋白胨) 20g
氯化钠 5g
蒸馏水 1000mL
pH7.4
3.13.2 制法
按上述成分配制，分装小试管，121℃高压灭菌15min。
3.13.3 靛基质试剂
3.13.3.1 柯凡克试剂：将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中。然后缓慢加入浓盐酸25mL。
3.13.3.2 欧－波试剂：将1g对二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95%乙醇内。然后缓慢加入浓盐酸20mL。
3.13.4 试验方法
挑取小量培养物接种，在36±1℃培养1～2d，必要时可培养4～5d。加入柯凡克试剂约0.5mL，轻摇试管，阳性者于试剂层呈深红色；或加入欧－波试剂约0.5mL，沿管壁流下，覆盖于培养液表面，阳性者于液面接触处呈玫瑰红色。
注：蛋白胨中应含有丰富的色氨酸。每批蛋白胨买来后，应先用已知菌种鉴定后方可使用。
3.14 硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用)
3.14.1 成分
牛肉膏 3g
酵母浸膏 3g
蛋白胨 10g
硫酸亚铁 0.2g
硫代硫酸钠 0.3g
氯化钠 5g
琼脂 12g
蒸馏水 1000mL
pH7.4
3.14.2 制法
加热溶解，校正pH，分装试管，115℃高压灭菌15min，取出直立候其凝固。
3.14.3 试验方法
挑取琼脂培养物，沿管壁穿刺，于36±1℃培养1～2d，观察结果。产硫化氢者使培养基变为黑色。
注：肠杆菌科细菌测定硫化氢的产生，应采用三糖铁琼脂或本培养基。
3.15 尿素琼脂
3.15.1 成分
蛋白胨 1g
氯化钠 5g
葡萄糖 1g
磷酸二氢钾 2g
0.4%酚红溶液 3mL
琼脂 20g
蒸馏水 1000mL
20%尿素溶液 100mL
pH7.2±0.1
3.15.2制法
将除尿素和琼脂以外的成分配好，并校正pH，加入琼脂，加热溶化并分装烧瓶。121℃高压灭菌15min。冷至50～55℃，加入经除菌过滤的尿素溶液。尿素的最终浓度为2%，最终pH应为7.2±0.1。分装于灭菌试管内，放成斜面备用。
3.15.3 试验方法
挑取琼脂培养物接种，在36±1℃培养24h，观察结果。尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色。
3.16 氰化钾(KCN)培养基
3.16.1 成分
蛋白胨 10g
氯化钠 5g
磷酸二氢钾 0.225g
磷酸氢二钠 5.64g
蒸馏水 1000mL
0.5%氰化钾溶液 20mL
pH7.6
3.16.2 制法
将除氰化钾以外的成分配好后分装烧瓶，121℃高压灭菌15min。放在冰箱内使其充分冷却。每100mL培养基加入0.5%氰化钾溶液2.0mL(最后浓度为1∶10000)，分装于12mm×100mm灭菌试管，每管约4mL，立刻用灭菌橡皮塞塞紧，放在4℃冰箱内，至少可保存两个月。同时，将不加氰化钾的培养基作为对照培养基，分装试管备用。
3.16.3 试验方法
将琼脂培养物接种于蛋白胨水内成为稀释菌液，挑取1环接种于氰化钾(KCN)培养基。并另挑取1环接种于对照培养基。在36±1℃培养1～2d，观察结果。如有细菌生长即为阳性(不抑制)，经2d细菌不生长为阴性(抑制)。
注：氰化钾是剧毒药物，使用时应小心，切勿沾染，以免中毒。夏天分装培养基应在冰箱内进行。试验失败的主要原因是封口不严，氰化钾逐渐分解，产生氢氰酸气体逸出，以致药物浓度降低，细菌生长，因而造成假阳性反应。试验时对每一环节都要特别注意。
3.17 硝酸盐培养基
3.17.1 成分
硝酸钾 0.2g
蛋白 5g
蒸馏水 1000mL
pH7.4
3.17.2 制法
溶解，校正pH，分装试管，每管约5mL，121℃高压灭菌15min。
3.17.3 硝酸盐还原试剂
3.17.3.1 甲液：将对氨基苯磺酸0.8g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中。
3.17.3.2 乙液：将甲萘胺0.5g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中。
3.17.4 试验方法
接种后在36±1℃培养1～4d，加入甲液和乙液各一滴，观察结果。硝酸盐还原为亚硝酸盐时于立刻或数分钟内显红色。
注：本试验阴性的原因有三：细菌不能还原硝酸盐；亚硝酸盐继续分解，生成氨和氮；培养基不适于细菌的生长。如欲检查培养基中硝酸盐是否未被分解，可再加入锌粉少许，可使硝酸盐还原为亚硝酸盐而呈现红色。
3.18 氧化酶试验
3.18.1 试剂
3.18.1.1 1%盐酸二甲基对苯二胺溶液：少量新鲜配制，干冰箱内避光保存。
3.18.1.2 1%α-萘酚－乙醇溶液。
3.18.2 试验方法
3.18.2.1 取白色洁净滤纸沾取菌落。加盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴，阳性者呈现粉红色，并逐渐加深；再加α-萘酚溶液一滴，阳性者于半分钟内呈现鲜蓝色。阴性于两分钟内不变色。
3.18.2.2 以毛细吸管吸取试剂，直接滴加于菌落上，其显色反应与以上相同。
3.19 细胞色素氧化酶试验
3.19.1 试剂
3.19.1.1 1%盐酸二甲基对苯二胺溶液。
3.19.1.2 1%α-萘酚－乙醇溶液。
3.19.2 试验方法
取37℃(或低于37℃)培养20h的斜面培养物一支，将两种试剂各2～3滴，从斜面上端滴下，并将斜面略加倾斜，使试剂混合液流经斜面上的培养物。如系平板培养物，则可用试剂混合液滴在菌落上。
3.19.3 结果
于2min内呈现蓝色者为阳性。阳性培养物大多数于半分钟内出现强阳性反应，2min以后出现微弱或可疑反应均作为阴性结果。
3.20 过氧化氢酶试验
3.20.1 试剂
3%过氧化氢溶液：临用时配制。
3.20.2 试验方法
挑取固体培养基上菌落一接种环，置于洁净试管内，滴加3%过氧化氢溶液2mL，观察结果。
3.20.3 结果
于半分钟内发生气泡者为阳性，不发生气泡者为阴性。
3.21 过氧化物酶试验
3.21.1 试剂
3.21.1.1 2%儿茶酚溶液。
3.21.1.2 3%过氧化氢溶液。
3.21.2 试验方法
挑取固体培养基上菌落一接种环，置于洁净试管内，滴加2%儿茶酚溶液1mL及3%过氧化氢溶液1mL。静置于室温(20℃)中30～60min，观察结果。
3.21.3 结果
阳性反应，细菌变为黑褐色；阴性反应，细菌不变色。
注：过氧化物酶的作用可受氰化钾的抑制。
3.22 磷酸盐缓冲液
3.22.1 储存液
磷酸二氢钾 34g
1mol/L氢氧化钠溶液 175mL
蒸馏水 825mL
pH7.2
3.22.2 制法
先将磷酸盐溶解于500mL蒸馏水中，用1mol/L氢氧化钠溶液校正pH后，再用蒸馏水稀释至1000mL。
3.22.3 稀释液：取储存液1.25mL，用蒸馏水稀释至1000mL。分装每瓶100mL或每管10mL，121℃高压灭菌15min。
3.23 明胶磷酸盐缓冲液
3.23.1 成分
明胶 2g
磷酸氢二钠 4g
蒸馏水 1000mL
pH6.2
3.23.2 制法
加热溶解，校正pH，121℃高压灭菌15min。
3.24 乳酸－苯酚溶液
3.24.1 成分
苯酚 10g
乳酸(比重1.21) 10g
甘油 20g
蒸馏水 10mL
3.24.2 制法
将苯酚在水中邮热溶解，然后加入乳酸及甘油。
3.24.3 用途
检验真菌形态时用。
4 一般培养基和专用培养基
4.1 肉浸液肉汤
4.1.1 成分
绞碎牛肉 500g
氯化钠 5g
蛋白胨 10g
磷酸氢二钾 2g
蒸馏水 1000mL
4.1.2 制法
将绞碎之去筋膜无油脂牛肉500g加蒸馏水1000mL，混合后放冰箱过夜，除去液面之浮油，隔水煮沸半小时，使肉渣完全凝结成块，用绒布过滤，并挤压收集全部滤液，加水补足原量。加入蛋白胨、氯化钠和磷酸盐，溶解后校正pH7.4～7.6煮沸并过滤，分装烧瓶，121℃高压灭菌30min。
4.2 肉浸液琼脂
4.2.1 成分
肉浸液肉汤(PH7.4) 1000mL
琼脂 17～20g
4.2.2 制法
加热溶化琼脂，分装烧瓶或试管，121℃高压灭菌30min。根据需要，倾注平板或放成斜面。
4.3 牛肉(或牛心)消化汤
4.3.1 成分
绞碎牛肉(或牛心) 1000g
15%氢氧化钠溶液 27mL
胰蛋白酶 40mL
三氯甲烷 1mL
氯化钠 10g
蒸馏水 2000mL
4.3.2 制法
4.3.2.1 称取碎牛肉，加蒸馏水，隔水加热到80℃，维持15min。
4.3.2.2 加氢氧化钠溶液，对pH试纸呈弱碱性，冷至40℃。
4.3.2.3 加胰蛋白酶、氯仿，在36±1℃放置4～5h，每小时摇动一二次。
4.3.2.4 4h后，吸取上层液5mL于试管中，加5%硫酸铜溶液0.1mL、4%氢氧化钠溶液5mL，混合之。若呈红色，则不须再消化，可由温箱取出。
4.3.2.5 加入15%乙酸溶液45mL，对pH试纸呈酸性。
4.3.2.6 煮沸15min，使胰蛋白酶破坏，冷后，放冰箱内一夜。
4.3.2.7 次日吸取上层清液，加氯化钠10g，并加水补足原量，煮沸。
4.3.2.8 校正pH7.4～7.6(加15%氢氧化钠溶液约10mL)，加热，用滤纸过滤，分装烧瓶，121℃高压灭菌20min。
注：①此培养基可作为琼脂培养基的基础，不需加蛋白胨。
②胰蛋白酶之配制：称取去脂绞碎的猪胰500g，加入乙醇500mL、蒸馏水1500mL，混合之，装人玻塞瓶内。每日摇匀三次。3d后，用绒布过滤挤出其汁，加盐酸至0.05%，放冰箱内保存备用。
4.4 血消化汤
4.4.1 成分
绞碎猪胃 100g
绞碎猪血块 100g
蒸馏水 1000mL
浓盐酸 10mL
4.4.2 制法
4.4.2.1 洗涤猪胃，除去油脂，保留胃粘膜，用绞肉机绞碎。
4.4.2.2 用绞肉机将猪血块绞碎。
4.4.2.3 将蒸馏水加热至55℃，加入猪胃、猪血块和盐酸，置55℃水浴中24h，时常加以摇动。
4.4.2.4 从水浴内取出，加入1moL/L碳酸钠溶液5mL，煮沸10min，置于冰箱内一夜。
4.4.2.5 吸取上层清液，加磷酸氢二钾1g，加热至75℃，加入1mol/L碳酸钠溶液45mL，煮沸，校正pH7.2～7.4。
4.4.2.6 用滤纸过滤，分装烧瓶，121℃高压灭菌20min。
注：①本培养基不含糖可供作鉴别培养基之基础，不需加蛋白胨和氯化钠。
②1mol/L碳酸钠溶液之配法：无水碳酸钠10.6g，溶于1000mL蒸馏水中。
4.5 豆粉琼脂
4.5.1 成分
牛心消化汤(PH7.4～7.6) 1000mL
琼脂 20g
黄豆粉浸液 50mL
4.5.2 制法
将琼脂加在牛心消化汤内，加热溶解，过滤。加入豌豆粉浸液，分装每瓶100mL，121℃高压灭菌15min。
4.5.2.1 豌豆粉浸液制法：取豌豆粉5g、氯化钠10g，加入蒸馏水100mL。置100℃水浴内加热1h，放于冰箱中过夜。吸取上清液即为豌豆浸液。
4.6 血琼脂
4.6.1 成分
pH7.4～7.6豆粉琼脂 100mL
脱纤维羊血(或兔血) 5～10mL
4.6.2 制法
加热溶化琼脂，冷至50℃，以灭菌手续加入脱纤维羊血，摇匀，倾注平板。亦可分装灭菌试管，置成斜面。亦可用其他营养丰富的基础培养基配制血琼脂。
4.7 营养琼脂
4.7.1 成分
蛋白胨 10g
牛肉膏 3g
氯化钠 5g
琼脂 15～20g
蒸馏水 1000mL
4.7.2 制法
将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内，加入15%氢氧化钠溶液约2mL，校正pH至7.2～7.4。加入琼脂，加热煮沸，使琼脂溶化。分装烧瓶，121℃高压灭菌15min。
注：此培养基可供一般细菌培养之用，可倾注平板或制成斜面。如用于菌落计数，琼脂量为1.5%；如作成平板或斜面，则应为2%。
4.8 营养肉汤
4.8.1 成分
蛋白陈 10g
牛肉膏 3g
氯化钠 5g
蒸馏水 1000mL
pH7.4
4.8.2 制法
按上述成分混合，溶解后校正pH，分装烧瓶，每瓶225mL，121℃高压灭菌15min。
4.9 乳糖胆盐发酵管
4.9.1 成分
蛋白胨 20g
猪胆盐(或牛、羊胆盐) 5g
乳糖 10g
0.04%滇甲酚紫水溶液 25mL
蒸馏水 1000mL
pH7.4
4.9.2 制法
将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，分装每管10mL，并放入一个小倒管，115℃高压灭菌15min。
注：双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外，其他成分加倍。
4.10 乳糖发酵管
4.10.1 成分
蛋白胨 20g
乳糖 10g
0.04%溴甲酚紫水溶液 25mL
蒸馏水 1000mL
pH7.4
4.10.2 制法
将蛋白胨及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，按检验要求分装30mL、10mL或3mL，并放入一个小倒管，115℃高压灭菌15min。
注：①双料乳糖发酵管除蒸馏水外，其他成分加倍。
②30mL和10mL乳糖发酵管专供酱油及酱类检验用，3mL乳糖发酵管供大肠菌群证实试验用。
4.11 EC肉汤
4.11.1 成分
胰蛋白胨 20g
3号胆盐(或混合胆盐) 1.5g
乳糖 5g
磷酸氢二钾 4g
磷酸二氢钾 1.5g
氯化钠 5g
蒸馏水 1000mL
4.11.2 制法
将上述成分混合，溶解后，分装有发酵倒管的试管中，121℃高压灭菌15min，最终pH为6.9±0.2。
4.12 缓冲蛋白胨水(BP)
4.12.1 成分
蛋白胨 10g
氯化钠 5g
磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O) 9g
磷酸二氢钾 1.5g
蒸馏水 1000mL
pH7.2
4.12.2 制法
按上述成分配好后以大烧瓶装，121℃高压灭菌15min。临用时无菌分装每瓶225mL。
注：本培养基供沙门氏菌前增菌用。
4.13 氯化镁孔雀绿增菌液(MM)
4.13.1 甲液
胰蛋白胨 5g
氯化钠 8g
磷酸二氢钾 1.6g
蒸馏水 1000mL
4.13.2 乙液
氯化镁(化学纯) 40g
蒸馏水 100mL
4.13.3 丙液
0.4%孔雀绿水溶液。
4.13.4 制法
分别按上述成分配好后，121℃高压灭菌15min备用。临用时取甲液90mL、乙液9mL、丙液0.9mL，以无菌操作混合即可。
注：本培养基亦称Rappaport 10(R10)增菌液。
4.14 四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB)
4.14.1 基础培养基
多胨或脙胨 5g
胆盐 1g
碳酸钙 10g
硫代硫酸钠 30g
蒸馏水 1000mL
4.14.2 碘溶液
碘 6g
碘化钾 5g
蒸馏水 20mL
4.14.3 制法
将基础培养基的各成分加入蒸馏水中，加热溶解，分装每瓶100mL。分装时应随时振摇，使其中的碳酸钙混匀。121℃高压灭菌15min备用。临用时每100mL基础培养基中加入碘溶液2mL、0.1%煌绿溶液1mL。
4.15 四硫磺酸钠煌绿增菌液(换用方法)
4.15.1 基础液
蛋白胨 10g
牛肉膏 5g
氯化钠 3g
碳酸钙 45g
蒸馏水 1000mL
将各成分加入于蒸馏水中，加热至约70℃溶解，校正pH至7.0±0.1，121℃高压灭菌20min。
4.15.2 硫代硫酸钠溶液
硫代硫酸钠(Na2S2O3·5H2O) 50g
蒸馏水 加至100mL
4.15.3 碘溶液
碘片 20g
碘化钾 25g
蒸馏水加至 100mL
将碘化钾充分溶解于是少量的蒸馏水中，加入碘片，振摇玻瓶至碘片全部溶解，再加入蒸馏水至规定量。贮于棕色玻瓶内，紧塞瓶盖备用。
4.15.4 煌绿水溶液
煌绿 0.5g
蒸馏水 100mL
存放暗处，不少于1d，使其自然灭菌。
4.15.5 牛胆盐溶液
干燥的牛胆盐 10g
蒸馏水 100mL
煮沸溶解，121℃高压灭菌20min。
4.15.6 制备
基础液 900mL
硫代硫酸钠溶液 100mL
碘液 20mL
煌绿溶液 2mL
牛胆盐溶液 50mL
临用前，按上列顺序，以无菌操作依次加入于基础液中，每加入一种成分，均应摇匀后再加入另一种成分。分装于灭菌瓶中，每瓶100mL。
4.16 亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)
4.16.1 成分
蛋白胨 5g
乳糖 4g
亚硒酸氢钠 4g
磷酸氢二钠 5.5g
磷酸二氢钾 4.58
L-胱氨酸 0.01g
蒸馏水 1000mL
4.16.2 1%L-胱氨酸－氢氧化钠溶液的配法：称取L－胱氨酸0.1g(或DL－胱氨酸0.2g)，加1mol/L氢氧化钠1.5mL，使溶解，再加入蒸馏水8.5mL即成。
4.16.3 制法：将除亚硒酸氢钠和L－胱氨酸以外的各成分溶解于900mL蒸馏水中，加热煮沸，俟冷备用。另将亚硒酸氢钠溶解于100mL蒸馏水中，加热煮沸，候冷，以无菌操作与上液混合。再加入1%L－肮氨酸－氢氧化钠溶液1mL。分装于灭菌瓶中，每瓶100mL，pH应为7.0±0.1。
4.17 GN增菌液
4.17.1 成分
胰蛋白胨 20g
葡萄糖 1g
甘露醇 2g
柠檬酸钠 5g
去氧胆酸钠 0.5g
磷酸氢二钾 4g
磷酸二氢钾 1.5g
氯化钠 5g
蒸馏水 1000mL
pH7.0
4.17.2 制法
按上述成分配好，加热使溶解，校正pH。分装每瓶225mL，115℃高压灭菌15min。
4.18 肠道菌增菌肉汤
4.18.1 成分
蛋白胨1 10g
葡萄糖 5g
牛胆盐 20g
磷酸氢二钠 8g
磷酸二氢钾 2g
煌绿 0.015g
蒸馏水 1000mL
pH7.2
4.18.2 制法
按上述成分配好，加热使溶解，校正pH。分装每瓶30mL，115℃高压灭菌15min。
4.19 亚硫酸铋琼脂(BS)
4.19.1 成分
蛋白胨 10g
牛肉膏 5g
葡萄糖 5g
硫酸亚铁 0.3g
磷酸氢二钠 4g
煌绿 0.025g
柠檬酸铋铵 2g
亚硫酸钠 6g
琼脂 18～20g
蒸馏水 1000mL
pH7.5
4.19.2 制法
4.19.2.1 将前面5种成分溶解于300mL蒸馏水中。
4.19.2.2 将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠另用50mL蒸馏水溶解。
4.19.2.3 将琼脂于600mL蒸馏水中煮沸溶解，冷至80℃
4.19.2.4 将以上三液合并，补充蒸馏水至1000mL，校正pH，加0.5%煌绿水溶液5mL，摇匀。冷至50～55℃，倾注平皿。
注：此培养基不需高压灭菌。制备过程不宜过分加热.以免降低其选择性。应在临用前一天制备，贮存于室温暗处。
超过48h不宜使用。
4.20 DHL琼脂(Deoxycholate Hydrogen Sulfide Lactose Agar)
4.20.1 成分
蛋白胨 20g
牛肉膏 3g
乳糖 10g
蔗糖 10g
去氧胆酸钠 1g
硫代硫酸钠 2.3g
柠檬酸钠 1g
柠檬酸铁铵 1g
中性红 0.03g
琼脂 18～20g
蒸馏水 1000mL
pH7.3
4.20.2 制法
将除中性红和琼脂以外的成分溶解于400mL蒸馏水中，校正pH。再将琼脂于600mL蒸馏水中煮沸溶解，两液合并，并加入0.5%中性红水溶液6mL，待冷至50～55℃，倾注平板。
4.21 HE琼脂(Hektoen Enteric Agar)
4.21.1 成分
脙胨 12g
牛肉膏 3g
乳糖 12g
蔗糖 12g
水杨素 2g
胆盐 20g
氯化钠 5g
琼脂 18～20g
蒸馏水 1000mL
0.4%溴麝香草酚蓝溶液 16mL
Andrade指示剂 20mL
甲液 20mL
乙液 20mL
pH7.5
4.21.2 制法
将前面七种成分溶解于400mL蒸馏水内作为基础液；将琼脂加入于600mL蒸馏水内，加热溶解。加入甲液和乙液于基础液内，校正pH。再加入指示剂，并与琼脂液合并，待冷至50～55℃，倾注平板。
注：①此培养基不可高压灭菌。
②甲液的配制
硫代硫酸钠 34g
柠檬酸铁铵 4g
蒸馏水 100mL
②乙液的配制
去氧胆酸钠 10g
蒸馏水 100mL
②Andrade指示剂
酸性复红 0.5g
1mol/L氢氧化钠溶液 16mL
蒸馏水 100mL
将复红溶解于蒸馏水中，加入氢氧化钠溶液。数小时后如复红褪色不全，再加氢氧化钠溶液1～2mL。
4.22 SS琼脂
4.22.1 基础培养基
牛肉膏 5g
脙胨 5g
三号胆盐 3.5g
琼脂 17g
蒸馏水 1000mL
再将两液混合，121℃高压灭菌15min，保存备用。
4.22.2 完全培养基
基础培养基 100mL
乳糖 10g
柠檬酸钠 8.5g
硫代硫酸钠 8.5g
10%柠檬酸铁溶液 10mL
1%中性红溶液 2.5mL
0.1%煌绿溶液 0.33mL
加热溶化基础培养基，按比例加入上述染料以外之各成分，充分混合均匀，校正至pH7.0，加入中性红和煌绿溶液，倾注平板。
注：①制好的培养基宜当日使用，或保存于冰箱内于48h内使用。
②煌绿溶液配好后应在10d以内使用。
③可以购用SS琼脂的干燥培养基。
4.23 Ws琼脂
4.23.1 成分
②胨 12g
牛肉膏 3g
氯化钠 5g
乳糖 12g
蔗糖 12g
十二烷基硫酸钠 2g
琼脂 15g
Andrade指示剂 20mL
0.4%溴麝香草酚蓝溶液 16mL
甲液 20mL
蒸馏水 1000mL
pH7.0
4.23.2 制法
除指示剂和甲液外，将其他成分加热溶解，不需消毒，校正pH后加入指示剂和甲液，倾注平板应呈草绿色。
注：①供沙门氏菌分离用。
②Andrade指示剂和甲液的配制均见HE琼脂。
4.24 麦康凯琼脂
4.24.1 成分
蛋白胨 17g
脙胨 3g
猪胆盐(或牛、羊胆盐) 5g
氯化钠 5g
琼脂 17g
蒸馏水 1000mL
乳糖 10g
0.01%结晶紫水溶液 10mL
0.5%中性红水溶液 5mL
4.24.2 制法
4.24.2.1 将蛋白胨、胨、胆盐和氯化钠溶解于400mL蒸馏水中，校正pH7.2。将琼脂加入600mL蒸馏水中，加热溶解。将两液合并，分装于烧瓶内，121℃高压灭菌15min备用。
4.24.2.2 临用时加热溶化琼脂，趁热加入乳糖，冷至50～55℃时，加入结晶紫和中性红水溶液，摇匀后倾注平板。
注：结晶紫及中性红水溶液配好后须经高压灭菌。
4.25 伊红美蓝琼脂(EMB)
4.25.1 成分
蛋白胨 10g
乳糖 10g
磷酸氢二钾 2g
琼脂 17g
2%伊红Y溶液 20mL
0.65%美蓝溶液 10mL
蒸馏水 1000mL
pH7.1
4.25.2 制法
将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正PH，分装于烧瓶内，121℃高压灭菌15min备用。临用时加入乳糖并加热溶化琼脂，冷至50～55℃，加入伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板。
4.26 三糖铁琼脂(TSI)
4.26.1 成分
蛋白胨 20g
牛肉膏 5g
乳糖 10g
蔗糖 10g
葡萄糖 1g
氯化钠 5g
硫酸亚铁铵〔e(NH4)2(SO4)2·6H2O〕 0.2g
硫代硫酸钠 0.2g
琼脂 12g
酚红 0.025g
蒸馏水 1000mL
pH7.4
4.26.2 制法
将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pH。加入琼脂，加热煮沸，以溶化琼脂。加入0.2%酚红水溶液12.5mL，摇匀。分装试管，装量宜多些，以便得到较高的底层。121℃高压灭菌15min。放置高层斜面备用。
4.27 三糖铁琼脂(换用方法)
4.27.1 成分
蛋白胨 15g
脙胨 5g
牛肉膏 3g
酵母膏 3g
乳糖 10g
蔗糖 10g
葡萄糖 1g
氯化钠 5g
硫酸亚铁 0.2g
硫代硫酸钠 0.3g
琼脂 12g
酚红 0.025g
蒸馏水 1000mL
pH7.4
4.27.2 制法
将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pH。加入琼脂，加热煮沸，以溶化琼脂。加入0.2%酚红水溶液12.5mL，摇匀。分装试管，装量宜多些，以便得到较高的底层。121℃高压灭菌15min，放置高层斜面备用。
4.28 克氏双糖铁琼脂(KI)
4.28.1 上层培养基成分
血消化汤(PH7.6) 500mL
琼脂 6.5g
硫代硫酸钠 0.1g
硫酸亚铁铵 0.1g
乳糖 5g
0.2%酚红溶液 5mL
4.28.2 下层培养基成分
血消化汤(pH7.6) 500mL
琼脂 2g
葡萄糖 1g
0.2%酚红溶液 5mL
4.28.3 制法
4.28.3.1 取血消化汤按上层和下层的琼脂用量，分别加入琼脂，加热溶解。
4.28.3.2 分别加入其他各种成分。将上层培养基分装于烧瓶内；将下层培养基分装于灭菌12mm×100mm试管内，每管约2mL。115℃高压灭菌10min。
4.28.3.3 将上层培养基放在56℃水浴箱内保温；将下层培养基直立放在室温内，使其凝固。
4.28.3.4 俟下层培养基凝固后，以无菌手续将上层培养基分装于下层培养基的上面，每管约1.5mL，放成斜面。
4.29 克氏双糖铁琼脂(换用方法)
4.29.1 成分
蛋白胨 20g
牛肉膏 3g
酵母膏 3g
乳糖 10g
葡萄糖 1g
氯化钠 5g
柠檬酸铁铵 0.5g
硫代硫酸钠 0.5g
琼脂 12g
酚红 0.025g
蒸馏水 1000mL
pH7.4
4.29.2 制法
将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pH。加入琼脂，加热煮沸，以溶化琼脂。加入0.2%酚红水溶液12.5mL，摇匀。分装试管，装量宜多些，以便得到比较高的底层。121℃高压灭菌15min。放置高层斜面备用。
4.30 半固体琼脂
4.30.1 成分
蛋白胨 1g
生肉膏 0.3g
氯化钠 0.5g
琼脂 0.35～0.4g
蒸馏水 100mL
pH7.4
4.30.2 制法
按以上成分配好，煮沸使溶解，并校正pH。分装小试管。121℃高压灭菌15min。直立凝固备用。
注：供动力观察、菌种保存、H抗原位相变异试验等用。
4.31 葡萄糖半固体发酵管
4.31.1 成分
蛋白胨 1g
牛肉膏 0.3g
氯化钠 0.5g
1.6%溴甲酚紫酒精溶液 0.1mL
葡萄糖 1g
琼脂 0.3g
蒸馏水 100mL
pH7.4
4.31.2 制法
将蛋白胨、牛肉膏和氯化钠加入于水中，校正pH后加入琼脂加热溶解，再加入指示剂和葡萄糖，分装小试管，灭菌121℃ 15 min。
4.32 5%乳糖发酵管
4.32.1 成分
蛋白胨 0.2g
氯化钠 0.5g
乳糖 5g
2%溴麝香草酚蓝水溶液 1.2mL
蒸馏水 100mL
pH7.4
4.32.2 制法
除乳糖以外的各成分溶解于50mL蒸馏水内，校正pH。将乳糖溶解于另外50mL蒸馏水内，分别灭菌121℃ 15min，将两液混合，以无菌操作分装于灭菌小试管内。
注：在此培养基内，大部分乳糖迟缓发酵的细菌可于1d内发酵。
4.33 CAYE培养基
此培养基附在肠毒素诊断试剂盒内，如无此培养基，亦可用Honda氏产毒肉汤。
4.34 Honda氏产毒肉汤
4.34.1 成分
水解酪蛋白 20g
酵母浸膏粉 10g
氯化钠 2.5g
磷酸氢二钠 15g
葡萄糖 5g
微量元素 0.5mL
蒸馏水 1000mL
pH7.5
4.34.2 制法
溶解后校正pH，高压灭菌121℃ 15min，待冷至45～50℃时，加入林可霉素溶液，每毫升培养基内含90μg。
4.34.3 微量元素配方
硫酸镁 5g，氯化铁 0.5g，氯化钻 2g，蒸馏水 100mL
4.35 Elek氏培养基(毒素测定用)
4.35.1 成分
胨 20g
麦芽糖 3g
乳糖 0.7g
氯化钠 5g
琼脂 15g
40%氢氧化钠溶液 1.5mL
蒸馏水 1000mL
pH7.8
4.35.2 制法
用500mL蒸馏水溶解琼脂以外的成分，煮沸，并用滤纸过滤。用1mo1/L氢氧化钠校正pH。用另外500mL蒸馏水加热溶解琼脂。将两液混合，分装试管10mL或20mL。121℃高压灭菌15min。临用时加热溶化琼脂倾注平板。
4.36 氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基
4.36.1 甲液：胰蛋白胨 10g
蒸馏水 1000mL
乙液：磷酸氢二钠 9.5g
蒸馏水 1000mL
丙液：氯化镁(MgCl2·6H2O) 40g
蒸馏水 400mL
以上分别在121℃灭菌15min。
丁液：孔雀绿 0.2g
蒸馏水 100mL
戊液：羧苄青霉素 1mg/mL
4.36.2 制法
取甲液620mL、乙液160mL、丙液212mL混合，再加入丁液6.4mL和戊液2.4mL，即为1000mL培养基。分装灭菌烧瓶，每瓶100mL，或灭菌试管10mL。
4.37 胰蛋白胨水
4.37.1 成分
胰蛋白胨 10g
蒸馏水 1000mL
pH7.0
4.37.2 制法
将上述成分溶解，校正pH。分装试管，121℃高压灭菌15min。
4.38 Rustigian氏尿素培养液
4.38.1 成分
尿素 20.0g
酵母浸膏 0.1g
磷酸二氢钾(KH2PO4) 0.091g
磷酸氢二钠(Na2HPO4) 0.095g
酚红 0.01g
蒸馏水 1000mL
4.38.2 制法
将上述成分于蒸馏水中溶解，校正pH为6.8±0.2。不要加热，过滤除菌，无菌分装于灭菌小试管中，每管为约3mL。
4.38.3 用途
尿素酶试验用。
4.39 氯化钠结晶紫增菌液
4.39.1 成分
蛋白胨 20g
氯化钠 40g
0.01%结晶紫溶液 5mL
蒸馏水 1000mL
pH9.0
4.39.2 制法
胨晶晶紫外，其他按上述成分配好，加热溶解。约加30%氢氧化钾溶液4.5mL，校正pH。加热煮沸，过滤。再加入结晶紫溶液，混合后分装试管。121℃高压灭菌15min。
4.40 氯化钠蔗糖琼脂
4.40.1 成分
蛋白胨 10g
牛肉膏 10g
氯化钠 50g
蔗糖 10g
琼脂 18g
0.2%溴麝香草酚蓝溶液 20mL
蒸馏水 1000mL
pH7.8
4.40.2 制法
将牛肉膏、蛋白胨及氯化钠溶解于蒸馏水中，校正pH。加入琼脂，加热溶解，过滤。加入指示剂，分装烧瓶100mL。121℃高压灭菌15min备用。临用前在100mL培养基内加入蔗糖1g，加热溶化并冷至50℃，倾注平板。
4.41 嗜盐菌选择性琼脂
4.41.1 成分
蛋白胨 20g
氯化钠 40g
琼脂 17g
0.01%结晶紫溶液 5mL
蒸馏水 1000mL
pH8.7
4.41.2 制法
除结晶紫和琼脂外，其他按上述成分配好，校正pH。加入琼脂，加热溶解。再加入结晶紫溶液，分装烧瓶，每瓶100mL。
4.42 3.5%氯化钠三糖铁琼脂
4.42.1 成分
三糖铁琼脂 1000mL
氯化钠 30g
4.42.2 制法
按4.26或4.27配制三糖铁琼脂，再加入氯化钠30g，分装试管，121℃高压灭菌15min。放置高层斜面备用。
4.43 氯化钠血琼脂
4.43.1 成分
酵母膏 3g
蛋白胨 10g
氯化钠 70g
磷酸氢二钠 5g
甘露醇 10g
结晶紫 0.001g
琼脂 15g
蒸馏水 1000mL
4.43.2 制法
调pH8.0加热30min(不必高压)，待冷至45℃左右时，加入新鲜人或兔血(5%～10%)混合均匀，倾注平皿。
4.44 嗜盐性试验培养基
4.44.1 成分
蛋白胨 2g
氯化钠 按不同量加
蒸馏水 100mL
pH7.7
4.44.2 制法
配制2%蛋白胨水，校正pH，共配制5瓶，每瓶100mL。每瓶分别加入不同量的氯化钠：(1)不加；(2)3g；(3)7g；(4)9g；(5)11g。待溶解后分装试管。121℃高压灭菌15min。
4.45 3.5%氯化钠生化试验培养基
4.45.1 成分及制法
根据所需糖的种类按3.2配制。只是将氯化钠含量改为3.5%，pH为7.7。
4.46 改良磷酸盐缓冲液(小肠结肠炎耶尔森氏菌专用)
4.46.1 成分
磷酸氢二钠(Na2HPO4 8.23g
磷酸二氢钠(NaH2PO4·H2O) 1.2g
氯化钠(NaCl) 5.0g
三号胆盐 1.5g
山梨醇 20g
4.46.2 制法
将磷酸盐及氯化钠溶于蒸馏水中，再加入三号胆盐及山梨醇，溶解后校正pH为7.6，分装试管，于121℃高压灭菌15min，备用。
4.47 CIN－1培养基
4.47.1 基础培养基
胰胨 20.0g
酵母浸膏 2.0g
甘露醇 20.0g
氯化钠 1.0g
去氧胆酸钠 2.0g
硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.01g
琼脂 12.0g
蒸馏水 950mL
pH7.5±0.1
将基础培养基高压灭菌。
4.47.2 Irgasan：以95%的乙醇作溶剂，溶解二苯醚，配成0.4%的溶液，待基础液冷至80℃时，加入1mL混匀。
4.47.3 冷至50℃时，加入：
中性红(3mg/mL) 10.0mL
结晶紫(0.1mg/mL) 10.0mL
头孢菌素(1.5mg/mL) 10.0mL
新生霉素(0.25mg/mL) 10.0mL
最后不断搅拌着加入10.0mL的10%氯化锶，倒平皿。
4.48 改良Y培养基
4.48.1 成分
蛋白胨 15.0g
氯化钠 5.0g
乳糖 10.0g
草酸钠 2.0g
去氧胆酸钠 6.0g
三号胆盐 5.0g
丙酮酸钠 2.0g
孟加拉红 40mg
水解酪蛋白 5.0g
琼脂 17.0g
蒸馏水 1000mL
4.48.2 制法
将上述成分混合，于121℃高压灭菌15min，待冷至45℃左右时，倾注平皿。最终pH7.4±0.1。
4.49 改良克氏双糖
4.49.1 成分
蛋白胨 20g
牛肉膏 3g
酵母膏 3g
山梨醇 20g
葡萄糖 1g
氯化钠 5g
柠檬酸铁铵 0.5g
硫代硫酸钠 0.5g
琼脂 12g
酚红 0.025g
蒸馏水 1000mL
pH7.4
4.49.2 制法
将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pH。加入0.02%酚红水溶液12.5mL，摇匀。分装试管，装量宜多些，以便得到比较高的底层。121℃高压灭菌15min，放置高层斜面备用。
4.50 快速硫化氢(H2S)试验琼脂
4.50.1 制法
A液：布氏杆菌肉汤 970mL
无水磷酸氢二钠 1.18g
无水磷酸二氢钾 0.23g
琼脂 2g
加热溶解，高压灭菌，121℃ 15min。加入B液10%硫酸亚铁(含7H2O)，C液10%偏亚硫酸氢钠，D液10%丙酮酸钠。
4.50.2 上述B、C、D溶液均新鲜配制，用除菌滤膜过滤。将此除菌溶液各1mL混合后再入A液中，无菌调pH到7.3，无菌分装，每管3mL，塞紧备用。
4.51 DNA酶甲基绿琼脂(DTA)
4.51.1 成分
DNA 2.0g
植物蛋白胨 5.0g
胰蛋白胨 15.0g
氯化钠 5.0g
琼脂(1.5%) 15.0g
蒸馏水 1000mL
pH7.3
4.51.2 制法
称取各成分后，加水徐徐加热，避免形成饼溶性丝状物，121℃ 15min高压。
4.51.3 甲基绿配制(MG)
配制0.5%的甲基绿水溶液。用等体积氯仿作5～7次抽提，直到氯仿层无色为止。过滤除菌，置4℃保存。
4.51.4 每100mL灭菌溶化的DTA培养基加1mL(MG)染料液，甲基绿最终浓度为0.005%。
4.52 Cary－Blair氏运送培养基
4.52.1 成分
硫乙醇酸钠 1.5g
磷酸氢二钠 1.1g
氯化钠 5g
琼脂 5g
蒸馏水 1000mL
1%氯化钙溶液 9mL
pH8.4
4.52.2 制法
除氯化钙外，其他均按上述成分配制，加热溶解。冷至50℃，加入氯化钙溶液，校正pH到8.4。分装试管，每支5mL，或注入具有胶塞的瓶内。121℃高压灭菌15min。
4.52.3 用途
作空肠弯曲杆菌、霍乱弧菌、沙门氏菌、志贺氏菌采样时用。
注：在该采样管中的标本，只能保存72h。
4.53 改良Camp－BAP培养基
4.53.1 成分
胰蛋白胨 10.0g
蛋白胨 10.0g
葡萄糖 1.0g
酵母浸膏 2.0g
氯化钠 5.0g
焦亚硫酸钠 0.1g
琼脂 15.0g
蒸馏水 1000mL
硫乙醇酸钠 1.5g
万古霉素 10mg
多粘菌素B 2500 国际单位
两性霉素B(Amphotericin B) 2mg
头孢霉素(Cephalosporin，亦可用ceporan) 15mg
脱纤维羊血 50mL
4.53.2 制法
4.53.2.1 除抗生素和羊血外，将其他成分混合，加热溶解，校正pH到7.0±0.2。装瓶，每瓶100mL。121℃高压灭菌15min，备用。此为布氏琼脂基础培养基。
4.53.2.2 临用前，加热溶解基础琼脂，冷至60℃。每100mL基础琼脂中，加入脱纤维羊血5mL、抗生素混合液0.5mL及两性霉素B。头孢霉素混合液0.5mL，摇匀，倾注平板。
4.53.3 说明
4.53.3.1 两性霉素B、头孢霉素混合液配法：称两性霉素B2mg和头孢霉素15mg与无菌蒸馏水5mL混合即成。
4.53.3.2 称量抗生素必须正确，操作必须小心慎重。
4.54 Skirrow氏培养基
4.54.1 成分
蛋白胨 15.0g
胰蛋白胨(tryptone) 2.5g
酵母浸膏 5.0g
氯化钠 5.0g
琼脂 15.0g
蒸馏水 1000.0mL
甲氧苄氨嘧啶(trimethoprim，TMP) 5.0mg
万古霉素(vancomycin) 10.0mg
多粘菌素B(polymyxin) 2500.0国际单位
冻溶马血 70.0mL
4.54.2 制法
4.54.2.1 除甲氧苄氨嘧啶、抗生素和冻溶马血外，将其他成分混合溶解。校正pH7.4，装瓶100mL。121℃高压灭菌15min，备用。此即血琼脂基础培养基。
4.54.2.2 临用前，加热溶解基础培养基，冷至60℃。每100mL基础培养基中，加入冻溶两次的马血7mL及TMP、抗生素混合液0.5mL，摇匀，倾注无菌平板。
4.54.3 用途
分离空肠弯曲菌之用。
4.54.4 说明
4.54.4.1 TMP、抗生素混合液配法：先配成乳酸TMP溶液，以乳酸62mg(约1～2滴)混合于100mL灭菌蒸馏水中，然后再加入TMP溶液。
取乳酸TMP溶液5mL，再加入万古霉素及多粘菌素B，摇匀后，即成TMP抗生素混合液。
4.54.4.2 TMP、抗生素的作用
4.54.4.2.1 TMP(甲氧苄氨嘧啶，又称磺胺增效剂或抗菌增效剂)：为广谱抗菌剂，其抗菌谱与磺胺嘧啶相似，但对链球菌及大多数革兰氏阴性菌的抗菌作用较磺胺嘧啶强，与抗生素合用有协同作用，能增加杀菌和抑菌作用。
4.54.4.2.2 万古霉素：是窄谱抗菌素，仅对革兰氏阳性菌有较强的杀菌和抑菌作用，如溶血性链球菌、草绿色链球菌、肠球菌、金黄色葡萄球菌等。
4.54.4.2.3 多粘菌素B：仅限于对革兰氏阴性菌，如对产气杆菌、流感杆菌、痢疾杆菌等。
4.54.4.2.4 TMP和抗生素称量必须正确，操作必须慎重小心。
4.55 TTC琼脂
4.55.1 成分
胰蛋白胨(tryptone) 17.0g
大豆胨 3.0g
葡萄糖 6.0g
氯化钠 2.5g
硫乙醇酸钠 0.5g
琼脂 15.0g
L－胱氨酸－盐酸(L－Cys·HCl) 0.25g
亚硫酸钠 0.1g
1%氯化血红素溶液 0.5mL
1%维生素K1溶液 0.1mL
2，3，5－氯化三苯四氮唑(TTC) 0.4g
蒸馏水 1000mL
4.55.2 制法
4.55.2.1 除1%氯化血红素、维生素K1和TTC外，将其他成分混合，加热溶解。L－胱氨酸先用少量氢氧化钠溶解后加入，校正pH7.2，然后加入预先配成的氯化血红素和维生素K1，充分摇匀。装瓶，每瓶100mL。121℃高压灭菌15min，备用。
4.55.2.2 临用前，溶解基础琼脂，每100mL基础培养基中，加入TTC40mg，充分摇匀，倾注无菌平板。
4.55.3 说明
4.55.3.1 将可疑空肠弯曲菌接种于平板上，在微氧环境下，于43℃培养48h。阳性菌落呈紫红色，空肠弯曲菌呈阳性反应；胎儿和肠道弯曲菌呈阴性反应。
4.55.3.2 1%氯化血红素溶液和1%维生素K1溶液配法：称取氯化血红素1g和1mol/L氢氧化钠5mL混合。再用蒸馏水稀释到100mL，即为1%氯化血红素溶液。
称取维生素K11g和纯乙醇99mL混合，或用维生素K1针剂。
4.56 甘氨酸培养基
4.56.1 成分
布氏(Brucella)肉汤 1000mL
琼脂 1.6g
甘氨酸(glycine)(又称氨基乙酸aminoacetic acid) 10.0g
4.56.2 制法
将以上成分混合，加热溶解，校正pH7.0±0.2，分装13mm×100mm试管，每支约4mL左右，121℃高压灭菌15min，备用。
4.56.3 说明
空肠弯曲菌对甘氨酸有耐受性，穿刺接种于甘氨酸培养基中，置于微需氧环境下，在43℃培养48h。在培养基表面出现云雾状现象为阳性，胎儿弯曲菌空肠亚种为阳性结果。
4.57 改良磷酸盐缓冲液
4.57.1 成分
磷酸氢二钠(Na2HPO4) 8.23g
磷酸二氢钠(NaH2PO4·H2O) 1.20g
氯化钠(NaCl) 5.0g
蒸馏水 1000.0mL
山梨醇 10.0g
胆盐 1.5g
4.57.2 制法
将磷酸盐及氯化钠溶于蒸馏水中，再加入山梨醇及胆盐，溶解后，校正pH为7.6，分装试管。于121℃高压灭菌15min，备用。
4.58 氯化镁孔雀绿肉汤
4.58.1 成分
1%胰胨水(高压灭菌) 156mL
1/15mo1/L磷酸氢二钠(Na2HPO4)溶液(高压灭菌) 40mL
40%(m/V)氯化镁(MgCl2·6H2O)水溶液(100℃煮沸数分钟) 53mL
0.2%孔雀绿溶液 1.6mL
4.58.2 制法
将上述几种溶液按列出的容量混合，即成氯化镁孔雀绿肉汤。分装试管，每管10mL，于4℃可保存10个月。如若配氯化镁孔雀绿羧节青霉素肉汤，除上述几种溶液外，再配制羧节青霉素(carpenicillin)溶液(溶解1mg于1mL水中)，将此溶液与其他溶液混合，即成。
4.59 胰酪胨大豆肉汤
4.59.1 成分
胰酪胨(或胰蛋白胨) 17g
植物蛋白胨(或大豆蛋白胨) 3g
氯化钠 100g
磷酸氢二钾 2.5g
葡萄糖 2.5g
蒸馏水 1000mL
4.59.2 制法
将上述成分混合，加热并轻轻搅拌并溶解，分装后，121℃高压灭菌15min，最终pH7.3±0.2。
4.60 Baird－Parker氏培养基
4.60.1 成分
胰蛋白胨 10g
牛肉膏 5g
酵母膏 1g
丙酮酸钠 10g
甘氨酸 12g
氯化锂(LiCl·6H2O) 5g
琼脂 20g
蒸馏水 950mL
PH7.5
4.60.2 增菌剂的配法
30%卵黄盐水50mL与除菌过滤的1%亚蹄酸钾溶液10mL混合，保存于冰箱内。
4.60.3 制法
将各成分加到蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解。冷至25℃，校正pH。分装每瓶95mL，121℃高压灭菌15min。临用时加热溶化琼脂，冷至50℃，每95mL加入预热至50℃的卵黄亚蹄酸钾增菌剂5mL，摇匀后倾注平板。培养基应是致密不透明的。使用前在冰箱储存不得超过48h。
4.61 7.5%氯化钠肉汤
4.61.1 成分
蛋白胨 10g
牛肉膏 3g
氯化钠 75g
蒸馏水 1000mL
pH7.4
4.61.2 制法
将上述成分加热溶解，校正pH，分装试管，121℃高压灭菌15min。
4.62 匹克氏肉汤
4.62.1 成分
含1%胰蛋白胨的牛心浸液 200mL
1：25000结晶紫盐水溶液 10mL
1：800三氮化钠溶液 10mL
脱纤维兔血(或羊血) 10mL
4.62.2 制法
将上述已灭菌的各种成分，用无菌手续依次混合，分装于无菌试管内，每管约2mL，保存于冰箱内备用。
4.63 3.8%柠檬酸钠溶液
4.63.1 成分
柠檬酸钠 3.8g
蒸馏水 100mL
4.63.2 制法
取柠檬酸钠3.8g，加蒸馏水到100mL，溶解后过滤，装瓶，121℃高压灭菌15min。
注：兔(人)血浆制备：取3.8%柠檬酸钠溶液一份加兔(或人)全血四份，混好静置之，则血球下降，即可得血浆进行试验。
4.64 甘露醇卵黄多粘菌素琼脂
4.64.1 成分
蛋白胨 10g
牛肉膏 1g
甘露醇 10g
氯化钠 10g
琼脂 15g
蒸馏水 1000mL
0.2%酚红溶液 13mL
50%卵黄液 50mL
多粘菌素B 100 国际单位/mL
pH7.4
4.64.2 制法
将前面五种成分加入于蒸馏水中，加热溶解，校正pH，加入酚红溶液。分装烧瓶，每瓶100mL，121℃高压灭菌15min。临用时加热溶化琼脂，冷至50℃，每瓶加入50%卵黄液5mL及多粘菌素B10000国际单位，混匀后倾注平板。
4.65 酪蛋白琼脂
4.65.1 成分
酪蛋白 10g
牛肉膏 3g
磷酸氢二钠 2g
氯化钠 5g
琼脂 15g
蒸馏水 1000mL
0.4%溴麝香草酚蓝溶液 12.5mL
pH7.4
4.65.2 制法
将除指示剂外的各成分混合，加热溶解(但酪蛋白不溶解)，校正pH。加入指示剂，分装烧瓶，121℃高压灭菌15min。临用时加热溶化琼脂，冷至50℃，倾注平板。
注：将菌株划线接种于平板上，如沿菌落周围有透明圈形成，即为能水解酪蛋白。
4.66 木糖－明胶培养基
4.66.1 成分
胰胨 10g
酵母膏 10g
木糖 10g
磷酸氢二钠 5g
明胶 120g
蒸馏水 1000mL
0.2%酚红溶液 25mL
pH7.6
4.66.2 制法
将除酚红以外的各成分混合，加热溶解，校正pH。加入酚红溶液，分装试管，121℃高压灭菌15min，迅速冷却。
4.67 庖肉培养基
4.67.1 成分
牛肉浸液 1000mL
蛋白胨 30g
酵母膏 5g
磷酸二氢钠 5g
葡萄糖 3g
可溶性淀粉 2g
碎肉渣适量
pH7.8
4.67.2 制法
4.67.2.1 称取新鲜除脂肪和筋膜的碎牛肉500g，加蒸馏水1000mL和1mol/L氢氧化钠溶液25mL，搅拌煮沸15min，充分冷却，除去表层脂肪，澄清，过滤，加水补足至1000mL。加入除碎肉渣外的各种成分，校正pH。
4.67.2.2 碎肉渣经水洗后晾至半干，分装15mm×150mm试管约2～3cm高，每管加入还原铁粉0.1～0.2g或铁屑少许。将上述液体培养基分装至每管内超过肉渣表面约1cm。上面覆盖溶化的凡士林或液体石蜡0.3～0.4cm。121℃高压灭菌15min。
4.68 卵黄琼脂培养基
4.68.1 成分
4.68.1.1 基础培养基
肉浸液 1000mL
蛋白胨 15g
氯化钠 5g
琼脂 25～30g
pH7.5
4.68.1.2 50%葡萄糖水溶液。
4.68.1.3 50%卵黄盐水悬液。
4.68.2 制法
制备基础培养基，分装每瓶100mL。121℃高压灭菌15min。临用时加热溶化琼脂，冷至50℃，每瓶内加入50%葡萄糖水溶液2mL和50%卵黄盐水悬液10～15mL，摇匀，倾注平板。
4.69 亚硫酸盐－多粘菌素－磺胺嘧啶琼脂(SPS)
4.69.1 成分
胰酶消化酪蛋白胨 15g
酵母膏 10g
柠檬酸铁 0.5g
琼脂 15g
蒸馏水 1000mL
10%亚硫酸钠水溶液(新配) 5mL
0.12%多粘菌素B硫酸盐水溶液 10mL
1.2%磺胺嘧啶钠水溶液 10mL
pH7.0
4.69.2 制法：前面五种成分配合后加热溶解，校正pH。分装每瓶100mL，121C高压灭菌15min。临
用时加热溶化琼脂，冷至50℃。按比例加入后3种溶液，摇匀，倾注平板。
4.70 液体硫乙醇酸盐培养基(FT)
4.70.1 成分
胰酶消化酪蛋白胨 15g
L－胱氨酸 0.5g
葡萄糖 5g
酵母膏 5g
氯化钠 2.5g
硫乙醇酸钠 0.5g
刃天青(Resazurin) 0.001g
琼脂 0.75g
蒸馏水 1000mL
pH7.1
4.70.2 制法
煮沸溶解，冷却后校正pH，分装试管，每管10mL，121℃高压灭菌15min。临用前隔水煮沸10min，以驱除培养基中溶解的氧气，迅速冷却。
4.71 含铁牛奶培养基
4.71.1 成分
新鲜全脂年奶 1000mL
硫酸亚铁 1g
蒸馏水 50mL
4.71.2 制法
将硫酸亚铁溶解于蒸馏水中，不断搅拌，缓慢地加入于1000mL牛奶中，混匀。分装试管，每管10mL，121℃高压灭菌15min。本培养基必须新鲜设备。
4.72 动力-硝酸盐培养基（A法）
4.72.1 成分
蛋白胨 5g
牛肉膏 3g
硝酸钾 1g
琼脂 3g
蒸馏水 1000mL
pH7.0
4.72.2 制法
加热溶解，校正pH。分装试管，每管10mL，121℃高压灭菌15min。
4.73 动力－硝酸盐培养基(B法)
4.73.1 成分
蛋白胨 5g
牛肉膏 3g
销酸钾 5g
磷酸氢二钠 2.5g
半乳糖 5g
甘油 5g
琼脂 3g
蒸馏水 1000mL
pH7.4
4.73.2 制法
将以上各成分混合，加热溶解，校正pH。分装试管，121℃高压灭菌15min。
4.74 血清肉汤
在肉浸液肉汤(3.1)中按10∶1以无菌操作加马(或羊、兔)血清即为血清肉汤。
4.75 马丁氏肉汤
4.75.1 成分
蛋白胨液 500mL
肉浸液 500mL
冰乙酸 6g
葡萄糖 10g
4.75.2 制法
4.75.2.1 将蛋白胨液500mL与肉浸液500mL混合，加热至80℃，加冰乙酸1mL，摇匀，再煮沸5min。
4.75.2.2 加15%氢氧化钠溶液约20mL，校正pH至7.2。
4.75.2.3 加乙酸钠6g，再校正pH至7.2。
4.75.2.4 继续煮沸10min，用滤纸过滤。在每1000mL肉汤内，再加葡萄糖10g。然后装瓶，每瓶500mL。放置高压灭菌器内经121℃灭菌15min，备用。
注：蛋白胨液的制备：取新鲜猪胃，去脂绞碎。称取350g加50℃左右蒸馏水1000mL，充分摇匀。再加盐酸(化学纯，比重1.19)10mL，经充分混合后，置56℃温箱中消化24h(每小时搅拌1～2次)，消化完毕后，加热，用滤纸过滤，备用。
4.76 明胶培养基
4.76.1 成分
蛋白胨 5g
牛肉膏 3g
明胶 120g
蒸馏水 1000mL
4.76.2 制法
将上述成分混合，置流动蒸气灭菌器内，加热溶解，校正pH至7.0～7.2，用绒布过滤。分装试管，121℃灭菌15min，备用。
4.77 察氏培养基
4.77.1 成分
硝酸钠 3g
磷酸氢二钾 1g
硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.5g
氯化钾 0.5g
硫酸亚铁 0.01g
蔗糖 30g
琼脂 20g
蒸馏水 1000mL
4.77.2 制法
加热溶解，分装后121℃灭菌20min。
4.77.3 用途
青霉、曲霉鉴定及保存菌种用。
4.78 高盐察氏培养基
4.78.1 成分
硝酸钠 2g
磷酸二氢钾 1g
硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.5g
氯化钾 0.5g
硫酸亚铁 0.01g
氯化钠 60g
蔗糖 30g
琼脂 20g
蒸馏水 1000mL
4.78.2 制法
加热溶解，分装后，115℃高压灭菌30min。必要时，可酌量增加琼脂。
4.78.3 用途
分离霉菌用。
4.79 马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)
4.79.1 成分
马铃薯(去皮切块) 300g
葡萄糖 20g
琼脂 20g
蒸馏水 1000mL
4.79.2 制法
将马铃薯去皮切块，加1000mL蒸馏水，煮沸10～20min。用纱布过滤，补加蒸馏水至1000mL。加入葡萄糖和琼脂，加热溶化，分装，121℃高压灭菌20min。
4.79.3 用途
分离培养霉菌。
4.80 马铃薯琼脂
4.80.1 成分
马铃薯(去皮切块) 200g
琼脂 20g
蒸馏水 1000mL
4.80.2 制法
同马铃薯葡萄糖琼脂。
4.80.3 用途
鉴定霉菌用。
4.81 孟加拉红培养基
4.81.1 成分
蛋白胨 5g
葡萄糖 10g
磷酸二氢钾 1g
硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.5g
琼脂 20g
1/3000孟加拉红溶液 100mL
蒸馏水 1000mL
氯霉素 0.1g
4.81.2 制法
上述各成分加入蒸馏水中溶解后，再加孟加拉红溶液。另用少量乙醇溶解氯霉素，加入培养基中，分装后，121℃灭菌20min。
4.81.3 用途
分离霉菌及酵母。
4.82 玉米粉琼脂
4.82.1 成分
玉米粉 60g
琼脂 15～18g
蒸馏水 1000mL
4.82.2 制法
将玉米粉加入蒸馏水中，搅匀，文火煮沸1h，纱布过滤，加琼脂后加热溶化，补足水量至1000mL。分装，121℃灭菌20min。
4.82.3 用途
鉴定假丝酵母及霉菌。
4.83 大米粉培养基
4.83.1 制法
将不含荧光物质的籼米挑去杂质和变质米粒，磨成粗粉，分装后121℃高压灭菌20min。
4.83.2 用途
霉菌产毒用。
4.84 亚硒酸盐煌绿增菌液
4.84.1 成分
蛋白胨 5g
酵母浸膏 5g
甘露醇 5g
牛磺胆酸钠 1g
20%亚硒酸氢钠溶液 20mL
0.25mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0) 100mL
2%煌绿溶液 0.25mL
蒸馏水 900mL
4.84.2 制法
4.84.2.1 将前面四种成分溶解于蒸馏水中。
4.84.2.2 校正pH，当用于干鸡蛋白样品时，pH8.2±0.1；用于其他干蛋品时，pH7.2±0.1；用于冰蛋品时pH7.0±0.1；121℃高压灭菌15min，放冷备用。
4.84.2.3 临用前加入灭菌的20%亚硒酸氢钠溶液及磷酸盐缓冲液，复查混合液的pH，必要时进行校正。
4.84.2.4 加入煌绿溶液定量分装于灭菌的烧瓶内，每瓶150mL，于1～5d内使用。
注：①20%亚硒酸氢钠溶液121℃高压灭菌15min。
②0.25mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0)配法：
磷酸氢二钾(无水) 21.8g
磷酸二氢钾(无水) 17.1g
蒸馏水 1000mL
121℃高压灭菌15min后备用。
4.85 煌绿肉汤增菌液
4.85.1 成分
肉浸液肉汤(或牛肉膏汤) 1000mL
磷酸氢二钾 1g
2%煌绿溶液 0.5～10mL
4.85.2 制法
4.85.2.1 将肉浸液肉汤加入磷酸氢二钾(原已有磷酸氢二钾者可不加)，校正pH，分装烧瓶，每瓶100mL，121℃高压灭菌20min。
4.85.2.2 2%煌绿水溶液于临用前配制。
4.85.2.3 按比例［见GB 4789.19—94《食品卫生微生物学检验蛋与蛋制品检验》］于肉汤内加入煌绿溶液，摇匀，备用。
注：①加入煌绿溶液时，肉汤温度不宜过高，一般以放冷为宜。
②煌绿的纯度不应低于93%。
4.86 0.1%蛋白胨水稀释剂
4.86.1 成分
蛋白胨 1g
蒸馏水 1000mL
4.86.2 制法
溶解蛋白胨于蒸馏水中，校正pH至7.0，121℃灭菌15min。
4.87 肠毒素产毒培养基
4.87.1 成分
蛋白胨 20g
胰消化酪蛋白 200mg(氨基酸)
氯化钠 5g
磷酸氢二钾 1g
磷酸二氢钾 1g
氯化钙 0.1g
硫酸镁 0.2g
芋酸 0.01g
蒸馏水 1000mL
琼脂 10～12g(固体透析培养用)
pH7.2～7.4
4.87.2 制法
除琼脂外将所有成分混于水中，溶解后调pH7.2～7.4，如用固体透析培养法再加入琼脂，121℃高压灭菌30min。
本标准规定了各种染色法、培养基和试剂。
本标准适用于食品和食物中毒样品中各类微生物的检验。
2 染色液配制及染色法
2.1 美蓝染色法
2.1.1 吕氏碱性美蓝染色液
美蓝 0.3g
95%乙醇 30mL
0.01%氢氧化钾溶液 100mL
将美蓝溶解于乙醇中，然后与氢氧化钾溶液混合。
2.1.2 染色法
将涂片在火焰上固定，待冷。滴加染液，染1～3min，水洗，待干，镜检。
2.1.3 结果
菌体呈蓝色。
2.2 革兰氏染色法
2.2.1 结晶紫染色液
结晶紫 1g
95%乙醇 20mL
1%草酸铵水溶液 80mL
将结晶紫溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。
2.2.2 革兰氏碘液
碘 1g
碘化钾 2g
蒸馏水 300mL
将碘与碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水至300mL。
2.2.3 沙黄复染液
沙黄 0.25g
95%乙醇 10mL
蒸馏水 90mL
将沙黄溶解于乙醇中，然后用蒸馏水稀释。
2.2.4 染色法
2.2.4.1 将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染1min，水洗。
2.2.4.2 滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗。
2.2.4.3 滴加95%乙醇脱色，约30s；或将乙醇滴满整个涂片，立即倾去，再用乙醇滴满整个涂片，脱色10s。
2.2.4.4 水洗，滴加复染液，复染1min。水洗，待干，镜检。
2.2.5 结果
革兰氏阳性菌呈紫色。革兰氏阴性菌呈红色。
注：亦可用1：10稀释石炭酸复红染色液作复染液，复染时间仅需10s。
2.3 耐酸性染色法(萎－倪二氏法)
2.3.1 石炭酸品红染色液
碱性品红 0.3g
95%乙醇 10mL
5%酚水溶液 90mL
将品红溶解于乙醇中，然后与酚溶液混合。
2.3.2 3%盐酸－乙醇
浓盐酸 3mL
95%乙醇 97mL
2.3.3 复染液
吕氏碱性美蓝染色液。
2.3.4 染色法
2.3.4.1 将涂片在火焰上加热固定，滴加石炭酸品红染色液，徐徐加热至有蒸气出现，但切不可使沸腾。染液如因蒸发减少时，应随时添加。染5min，倾去染液，水洗。
2.3.4.2 滴加盐酸－乙醇脱色，直至无红色脱落为止(所需时间视涂片厚薄而定，一般为1～3min)，水洗。
2.3.4.3 滴加吕氏碱性美蓝染色液，复染30s～1min，水洗，待干，镜检。
2.3.5 结果：耐酸性细菌呈红色，其他细菌、细胞等物质呈蓝色。
2.4 柯氏染色法
2.4.1 染色液
2.4.1.1 0.5%沙黄液。
2.4.1.2 0.5%孔雀绿液。
2.4.2 染色法
2.4.2.1 将涂片在火焰上固定，滴加0.5%沙黄液，并加热至出现气泡，约2～3min，水洗。
2.4.2.2 滴加0.5%孔雀绿液，复染40～50s。水洗，待干，镜检。
2.4.3 结果
布氏杆菌呈红色，其他细菌及细胞呈绿色。
2.5 奥尔特氏荚膜染色法
2.5.1 染色液
沙黄 3g
蒸馏水 100mL
用乳钵研磨溶解。
2.5.2 染色法
将涂片在火焰上固定，滴加染色液，并加热至产生蒸气后，继续染3min。水洗，待干，镜检。
2.5.3 结果
炭疽芽胞杆菌菌体呈赤褐色，荚膜呈黄色。
2.6 瑞氏染色法
2.6.1 染色液
瑞氏色素 0.1g
甲醇 60mL
用乳钵研磨溶解。
2.6.2 染色法
2.6.2.1 涂片待自然干燥后，滴加染色液，固定1min。
2.6.2.2 加入等量蒸馏水(pH6.5)，染色3～5min。
2.6.2.3 用蒸馏水冲洗，待干，镜检。
2.7 鞭毛染色法
2.7.1 染色液的配制
2.7.1.1 甲液：称丹宁酸5g、氯化高铁(FeCl3)1.5g，溶于100mL蒸馏水中，待溶解后加入1%的氢氧化钠溶液1mL和15%的甲醛溶液2mL。
2.7.1.2 乙液：称2g硝酸银溶于100mL蒸馏水中。
在90mL乙液中滴加浓氢氧化铵溶液，到出现沉淀后，再滴加使其变为澄清，然后用其余10mL乙液小心滴加至澄清液中，至出现轻微雾状为止(此为关键性操作，应特别小心)。滴加氢氧化铵和用剩余乙液回滴时，要边滴边充分摇荡，染液当天配，当天使用，2～3d基本无效。
2.7.2 染色法
在风干的载玻片上滴加甲液，4～6min后，用蒸馏水轻轻冲净。再加乙液，缓缓加热至冒汽，维持约半分钟(加热时注意勿使出现干燥面)。在菌体多的部位可呈深褐色到黑色，停止加热，用水冲净，干后镜检，菌体及鞭毛为深褐色到黑色。
2.8 碱性复红染色法
将0.5g碱性复红染料溶解于20mL95%乙醇中，然后用蒸馏水稀释至100mL。如有不溶物时，可用滤纸过滤，或静置后取上清液备用。
注：本染色液系用于苏云金芽胞内蛋白质毒素结晶的染色，藉以与蜡样芽胞杆菌相区别。
3 生化试验培养基和试剂
3.1 Hugh－Leifson培养基(O/F试验用)
3.1.1 成分
蛋白胨 2g
氯化钠 5g
磷酸氢二钾 0.3g
琼脂 4g
葡萄糖 10g
0.2%溴麝香草酚蓝溶液 12mL
蒸馏水 1000mL
pH7.2
3.1.2 制法
将蛋白胨和盐类加水溶解后，校正pH至7.2。加入葡萄糖、琼脂煮沸，溶化琼脂，然后加入指示剂。混匀后，分装试管，121℃高压灭菌15min，直立凝固备用。
3.1.3 试验方法
从斜面上挑取小量培养物作穿刺接种，同时接种两支培养基，其中一支于接种后滴加溶化的1%琼脂液于表面，高度约1cm，于36±1℃培养。
3.1.4 结果
3.2 糖发酵管
3.2.1 成分
?∨Ｈ飧唷 ?g
蛋白胨 10g
氯化钠 3g
磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O) 2g
0.2%滇麝香草酚蓝溶液 12mL
蒸馏水 1000mL
pH7.4
3.2.2 制法
3.2.2.1 葡萄糖发酵管按上述成分配好后，按0.5%加入葡萄糖，分装于有一个倒置小管的小试管内，121℃高压灭菌15min。
3.2.2.2 其他各种糖发酵管可按上述成分配好后，分装每瓶100mL，121℃高压灭菌15min。另将各种糖类分别配好10%溶液，同时高压灭菌。将5mL糖溶液加入于100mL培养基内，以无菌操作分装小试管。
注：蔗糖不纯，加热后会自行水解者，应采用过滤法除菌。
3.2.3 试验方法：从琼脂斜面上挑取小量培养物接种，于36±1℃培养，一般观察2～3d。迟缓反应需观察14～30d。
3.3 ONPG培养基
3.3.1 成分
邻硝基酚β－D-半乳糖昔(ONPG) 60mg
(O－Nitrophenyl－β－D－galactopyranoside)
0.01mol/L磷酸钠缓冲液(pH7.5) 10mL
1%蛋白胨水(PH7.5) 30mL
3.3.2 制法
将ONPG溶于缓冲液内，加入蛋白胨水，以过滤法除菌，分装于10mm×75mm试管，每管0.5mL，用橡皮塞塞紧。
3.3.3 试验方法
自琼脂斜面上挑取培养物1满环接种，于36±1℃培养1～3h和24h观察结果。如果β－半乳糖苷酶产生，则于1～3h变黄色，如无此酶则24h不变色。
3.4 缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR和VP试验用)
3.4.1 成分
磷酸氢二钾 5g
多胨 7g
葡萄糖 5g
蒸馏水 1000mL
pH7.0
3.4.2 制法
溶化后校正pH，分装试管，每管1mL，121℃高压灭菌15min。
3.4.3甲基红(MR)试验
自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中，于36±1℃培养2～5d，哈夫尼亚菌则应在22～25℃培养。滴加甲基红试剂一滴，立即观察结果。鲜红色为阳性，黄色为阴性。甲基红试剂配法：10mg甲基红溶于30mL95%乙醇中，然后加入20mL蒸馏水。
3.4.4 V－P试验
用琼脂培养物接种本培养基中，于36±1℃培养2～4d。哈夫尼亚菌则应在22～25℃培养。加入6%α－萘酚－乙醇溶液0.5mL和40%氢氧化钾溶液0.2mL，充分振摇试管，观察结果。阳性反应立刻或于数分钟内出现红色，如为阴性，应放在36±1℃下培养4h再进行观察。
3.5 西蒙氏柠檬酸盐培养基
3.5.1 成分
氯化钠 5g
硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.2g
磷酸二氢铵 1g
磷酸氢二钾 1g
柠檬酸钠 5g
琼脂 20g
蒸馏水 1000mL
0.2%溴麝香草酚蓝溶液 40mL
pH6.8
3.5.2 制法
先将盐类溶解于水内，校正pH，再加琼脂，加热溶化。然后加入指示剂，混合均匀后分装试管，121℃高压灭菌15min。放成斜面。
3.5.3 试验方法
挑取少量琼脂培养物接种，于36±1℃培养4d，每天观察结果。阳性者斜面上有菌落生长，培养基从绿色转为蓝色。
3.6 克氏拧檬酸盐培养基
3.6.1 成分
柠檬酸钠 3g
葡萄糖 0.2g
酵母浸膏 0.5g
单盐酸半胱氨酸 0.1g
磷酸二氢钾 1g
氯化钠 5g
0.2%酚红溶液 6mL
琼脂 15g
蒸馏水 1000mL
3.6.2 制法
加热溶解，分装试管，121℃高压灭菌15min。放成斜面。
3.6.3 试验方法
用琼脂培养物接种整个斜面，在36±1℃培养7d，每天观察结果。阳性者培养基变为红色。
3.7 丙二酸钠培养基
3.7.1 成分
酵母浸膏 1g
硫酸铵 2g
磷酸氢二钾 0.6g
磷酸二氢钾 0.4g
氯化钠 2g
丙二酸钠 3g
0.2%溴麝香草酚蓝溶液 12mL
蒸馏水 1000mL
pH6.8
3.7.2 制法
先将酵母浸膏和盐类溶解于水，校正pH后再加入指示剂，分装试管，121℃高压灭菌15min。
3.7.3 试验方法
用新鲜的琼脂培养物接种，于36±1℃培养48h，观察结果。阳性者由绿色变为蓝色。
3.8 葡葡糖铵培养基
3.8.1 成分
氯化钠 5g
硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.2g
磷酸二氢铵 1g
磷酸氢二钾 1g
葡萄糖 2g
琼脂 20g
蒸馏水 1000mL
0.2%溴麝香草酚蓝溶液 40mL
pH6.8
3.8.2 制法
先将盐类和糖溶解于水内，校正pH，再加琼脂，加热溶化，然后加入指示剂，混合均匀后分装试管，121℃高压灭菌15min，放成斜面。
3.8.3 试验方法
用接种针轻轻触及培养物的表面，在盐水管内做成极稀的悬液，肉眼观察不见混浊，以每一接种环内含菌数在20～100之间为宜。将接种环灭菌后挑取菌液接种，同时再以同法接种普通斜面一支作为对照。于36±1℃培养24h。阳性者葡萄糖铵斜面上有正常大小的菌落生长；阴性者不生长，但在对照培养基上生长良好。如在葡萄糖铵斜面生长极微小的菌落可视为阴性结果。
注：容器使用前应用清洁液浸泡。再用清水、蒸馏水冲洗干净，并用新棉花做成棉塞，干热灭菌后使用。如果操作时不注意，有杂质污染时，易造成假阳性的结果。
3.9 马尿酸钠培养基
3.9.1 成分
马尿酸钠 1g
肉浸液 100mL
3.9.2 制法
将马尿酸钠溶解于肉浸液内，分装于小试管内，并于管壁画一横线。以标志管内液面高度，高压灭菌121℃20min。
3.9.3 试剂
三氯化铁(FeCl3·6H2O)12g，溶于2%盐酸溶液100mL中即成。
3.9.4 试验方法
用纯培养物接种，于42℃培养48h，观察培养液是否到达试管壁上记号处，如不足时，用蒸馏水补足至原量。经离心沉淀，吸取上清液0.8mL，加入三氯化铁试剂0.2mL，立即混合均匀，经10～15min，观察结果。
3.9.5 结果：出现恒久之沉淀物为阳性。
3.10 营养明胶
3.10.1 成分
蛋白胨 5g
牛肉膏 3g
明胶 120g
蒸馏水 1000mL
pH6.8～7.0
3.10.2 制法
加热溶解、校正至pH7.4～7.6，分装小管，121℃高压灭菌10min，取出后迅速冷却，使其凝固。复查最终pH应为6.8～7.0。
3.10.3 试验方法
用琼脂培养物穿刺接种，放在22～25℃培养，每天观察结果，记录液化时间。或放在36士1℃培养，每天取出，放冰箱内30min后再观察结果。
3.11 苯丙氨酸培养基
3.11.1 成分
酵母浸膏 3g
DI－苯丙氨酸(或L－苯丙氨酸1g) 2g
磷酸氢二钠 1g
氯化钠 5g
琼脂 12g
蒸馏水 1000mL
3.11.2 制法
加热溶解后分装试管，121℃高压灭菌15min，使成斜面。
3.11.3 试验方法
自琼脂斜面上挑取大量培养物，移种于苯丙氨酸琼脂，在36±1℃培养4h或18～24h。滴加10%三氯化铁溶液2～3滴，自斜面培养物上流下，苯丙氨酸脱氨酶阳性者呈深绿色。
3.12 氨基酸脱羧酶试验培养基
3.12.1 成分
蛋白胨 5g
酵母浸膏 3g
葡萄糖 1g
蒸馏水 1000mL
1.6%滇甲酚紫－乙醇溶液 1mL
L－氨基酸或DL－氨基酸 0.5或1g/100mL
pH6.8
3.12.2 制法
除氨基酸以外的成分加热溶解后，分装每瓶100mL，分别加入各种氨基酸：赖氨酸、精氨酸和鸟氨酸。L－氨基酸按0.5%加入，DL－氨基酸按1%加入。再行校正pH至6.8。对照培养基不加氨基酸。分装于灭菌的小试管内，每管0.5mL，上面滴加一层液体石蜡，115℃高压灭菌10min。
3.12.3 试验方法
从琼脂斜面上挑取培养物接种，于36±1℃培养18～24h，观察结果。氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱，培养基应呈紫色。阴性者无碱性产物，但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色。对照管应为黄色。
3.13 蛋白胨水(靛基质试验用)
3.13.1 成分
蛋白胨(或胰蛋白胨) 20g
氯化钠 5g
蒸馏水 1000mL
pH7.4
3.13.2 制法
按上述成分配制，分装小试管，121℃高压灭菌15min。
3.13.3 靛基质试剂
3.13.3.1 柯凡克试剂：将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中。然后缓慢加入浓盐酸25mL。
3.13.3.2 欧－波试剂：将1g对二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95%乙醇内。然后缓慢加入浓盐酸20mL。
3.13.4 试验方法
挑取小量培养物接种，在36±1℃培养1～2d，必要时可培养4～5d。加入柯凡克试剂约0.5mL，轻摇试管，阳性者于试剂层呈深红色；或加入欧－波试剂约0.5mL，沿管壁流下，覆盖于培养液表面，阳性者于液面接触处呈玫瑰红色。
注：蛋白胨中应含有丰富的色氨酸。每批蛋白胨买来后，应先用已知菌种鉴定后方可使用。
3.14 硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用)
3.14.1 成分
牛肉膏 3g
酵母浸膏 3g
蛋白胨 10g
硫酸亚铁 0.2g
硫代硫酸钠 0.3g
氯化钠 5g
琼脂 12g
蒸馏水 1000mL
pH7.4
3.14.2 制法
加热溶解，校正pH，分装试管，115℃高压灭菌15min，取出直立候其凝固。
3.14.3 试验方法
挑取琼脂培养物，沿管壁穿刺，于36±1℃培养1～2d，观察结果。产硫化氢者使培养基变为黑色。
注：肠杆菌科细菌测定硫化氢的产生，应采用三糖铁琼脂或本培养基。
3.15 尿素琼脂
3.15.1 成分
蛋白胨 1g
氯化钠 5g
葡萄糖 1g
磷酸二氢钾 2g
0.4%酚红溶液 3mL
琼脂 20g
蒸馏水 1000mL
20%尿素溶液 100mL
pH7.2±0.1
3.15.2制法
将除尿素和琼脂以外的成分配好，并校正pH，加入琼脂，加热溶化并分装烧瓶。121℃高压灭菌15min。冷至50～55℃，加入经除菌过滤的尿素溶液。尿素的最终浓度为2%，最终pH应为7.2±0.1。分装于灭菌试管内，放成斜面备用。
3.15.3 试验方法
挑取琼脂培养物接种，在36±1℃培养24h，观察结果。尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色。
3.16 氰化钾(KCN)培养基
3.16.1 成分
蛋白胨 10g
氯化钠 5g
磷酸二氢钾 0.225g
磷酸氢二钠 5.64g
蒸馏水 1000mL
0.5%氰化钾溶液 20mL
pH7.6
3.16.2 制法
将除氰化钾以外的成分配好后分装烧瓶，121℃高压灭菌15min。放在冰箱内使其充分冷却。每100mL培养基加入0.5%氰化钾溶液2.0mL(最后浓度为1∶10000)，分装于12mm×100mm灭菌试管，每管约4mL，立刻用灭菌橡皮塞塞紧，放在4℃冰箱内，至少可保存两个月。同时，将不加氰化钾的培养基作为对照培养基，分装试管备用。
3.16.3 试验方法
将琼脂培养物接种于蛋白胨水内成为稀释菌液，挑取1环接种于氰化钾(KCN)培养基。并另挑取1环接种于对照培养基。在36±1℃培养1～2d，观察结果。如有细菌生长即为阳性(不抑制)，经2d细菌不生长为阴性(抑制)。
注：氰化钾是剧毒药物，使用时应小心，切勿沾染，以免中毒。夏天分装培养基应在冰箱内进行。试验失败的主要原因是封口不严，氰化钾逐渐分解，产生氢氰酸气体逸出，以致药物浓度降低，细菌生长，因而造成假阳性反应。试验时对每一环节都要特别注意。
3.17 硝酸盐培养基
3.17.1 成分
硝酸钾 0.2g
蛋白 5g
蒸馏水 1000mL
pH7.4
3.17.2 制法
溶解，校正pH，分装试管，每管约5mL，121℃高压灭菌15min。
3.17.3 硝酸盐还原试剂
3.17.3.1 甲液：将对氨基苯磺酸0.8g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中。
3.17.3.2 乙液：将甲萘胺0.5g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中。
3.17.4 试验方法
接种后在36±1℃培养1～4d，加入甲液和乙液各一滴，观察结果。硝酸盐还原为亚硝酸盐时于立刻或数分钟内显红色。
注：本试验阴性的原因有三：细菌不能还原硝酸盐；亚硝酸盐继续分解，生成氨和氮；培养基不适于细菌的生长。如欲检查培养基中硝酸盐是否未被分解，可再加入锌粉少许，可使硝酸盐还原为亚硝酸盐而呈现红色。
3.18 氧化酶试验
3.18.1 试剂
3.18.1.1 1%盐酸二甲基对苯二胺溶液：少量新鲜配制，干冰箱内避光保存。
3.18.1.2 1%α-萘酚－乙醇溶液。
3.18.2 试验方法
3.18.2.1 取白色洁净滤纸沾取菌落。加盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴，阳性者呈现粉红色，并逐渐加深；再加α-萘酚溶液一滴，阳性者于半分钟内呈现鲜蓝色。阴性于两分钟内不变色。
3.18.2.2 以毛细吸管吸取试剂，直接滴加于菌落上，其显色反应与以上相同。
3.19 细胞色素氧化酶试验
3.19.1 试剂
3.19.1.1 1%盐酸二甲基对苯二胺溶液。
3.19.1.2 1%α-萘酚－乙醇溶液。
3.19.2 试验方法
取37℃(或低于37℃)培养20h的斜面培养物一支，将两种试剂各2～3滴，从斜面上端滴下，并将斜面略加倾斜，使试剂混合液流经斜面上的培养物。如系平板培养物，则可用试剂混合液滴在菌落上。
3.19.3 结果
于2min内呈现蓝色者为阳性。阳性培养物大多数于半分钟内出现强阳性反应，2min以后出现微弱或可疑反应均作为阴性结果。
3.20 过氧化氢酶试验
3.20.1 试剂
3%过氧化氢溶液：临用时配制。
3.20.2 试验方法
挑取固体培养基上菌落一接种环，置于洁净试管内，滴加3%过氧化氢溶液2mL，观察结果。
3.20.3 结果
于半分钟内发生气泡者为阳性，不发生气泡者为阴性。
3.21 过氧化物酶试验
3.21.1 试剂
3.21.1.1 2%儿茶酚溶液。
3.21.1.2 3%过氧化氢溶液。
3.21.2 试验方法
挑取固体培养基上菌落一接种环，置于洁净试管内，滴加2%儿茶酚溶液1mL及3%过氧化氢溶液1mL。静置于室温(20℃)中30～60min，观察结果。
3.21.3 结果
阳性反应，细菌变为黑褐色；阴性反应，细菌不变色。
注：过氧化物酶的作用可受氰化钾的抑制。
3.22 磷酸盐缓冲液
3.22.1 储存液
磷酸二氢钾 34g
1mol/L氢氧化钠溶液 175mL
蒸馏水 825mL
pH7.2
3.22.2 制法
先将磷酸盐溶解于500mL蒸馏水中，用1mol/L氢氧化钠溶液校正pH后，再用蒸馏水稀释至1000mL。
3.22.3 稀释液：取储存液1.25mL，用蒸馏水稀释至1000mL。分装每瓶100mL或每管10mL，121℃高压灭菌15min。
3.23 明胶磷酸盐缓冲液
3.23.1 成分
明胶 2g
磷酸氢二钠 4g
蒸馏水 1000mL
pH6.2
3.23.2 制法
加热溶解，校正pH，121℃高压灭菌15min。
3.24 乳酸－苯酚溶液
3.24.1 成分
苯酚 10g
乳酸(比重1.21) 10g
甘油 20g
蒸馏水 10mL
3.24.2 制法
将苯酚在水中邮热溶解，然后加入乳酸及甘油。
3.24.3 用途
检验真菌形态时用。
4 一般培养基和专用培养基
4.1 肉浸液肉汤
4.1.1 成分
绞碎牛肉 500g
氯化钠 5g
蛋白胨 10g
磷酸氢二钾 2g
蒸馏水 1000mL
4.1.2 制法
将绞碎之去筋膜无油脂牛肉500g加蒸馏水1000mL，混合后放冰箱过夜，除去液面之浮油，隔水煮沸半小时，使肉渣完全凝结成块，用绒布过滤，并挤压收集全部滤液，加水补足原量。加入蛋白胨、氯化钠和磷酸盐，溶解后校正pH7.4～7.6煮沸并过滤，分装烧瓶，121℃高压灭菌30min。
4.2 肉浸液琼脂
4.2.1 成分
肉浸液肉汤(PH7.4) 1000mL
琼脂 17～20g
4.2.2 制法
加热溶化琼脂，分装烧瓶或试管，121℃高压灭菌30min。根据需要，倾注平板或放成斜面。
4.3 牛肉(或牛心)消化汤
4.3.1 成分
绞碎牛肉(或牛心) 1000g
15%氢氧化钠溶液 27mL
胰蛋白酶 40mL
三氯甲烷 1mL
氯化钠 10g
蒸馏水 2000mL
4.3.2 制法
4.3.2.1 称取碎牛肉，加蒸馏水，隔水加热到80℃，维持15min。
4.3.2.2 加氢氧化钠溶液，对pH试纸呈弱碱性，冷至40℃。
4.3.2.3 加胰蛋白酶、氯仿，在36±1℃放置4～5h，每小时摇动一二次。
4.3.2.4 4h后，吸取上层液5mL于试管中，加5%硫酸铜溶液0.1mL、4%氢氧化钠溶液5mL，混合之。若呈红色，则不须再消化，可由温箱取出。
4.3.2.5 加入15%乙酸溶液45mL，对pH试纸呈酸性。
4.3.2.6 煮沸15min，使胰蛋白酶破坏，冷后，放冰箱内一夜。
4.3.2.7 次日吸取上层清液，加氯化钠10g，并加水补足原量，煮沸。
4.3.2.8 校正pH7.4～7.6(加15%氢氧化钠溶液约10mL)，加热，用滤纸过滤，分装烧瓶，121℃高压灭菌20min。
注：①此培养基可作为琼脂培养基的基础，不需加蛋白胨。
②胰蛋白酶之配制：称取去脂绞碎的猪胰500g，加入乙醇500mL、蒸馏水1500mL，混合之，装人玻塞瓶内。每日摇匀三次。3d后，用绒布过滤挤出其汁，加盐酸至0.05%，放冰箱内保存备用。
4.4 血消化汤
4.4.1 成分
绞碎猪胃 100g
绞碎猪血块 100g
蒸馏水 1000mL
浓盐酸 10mL
4.4.2 制法
4.4.2.1 洗涤猪胃，除去油脂，保留胃粘膜，用绞肉机绞碎。
4.4.2.2 用绞肉机将猪血块绞碎。
4.4.2.3 将蒸馏水加热至55℃，加入猪胃、猪血块和盐酸，置55℃水浴中24h，时常加以摇动。
4.4.2.4 从水浴内取出，加入1moL/L碳酸钠溶液5mL，煮沸10min，置于冰箱内一夜。
4.4.2.5 吸取上层清液，加磷酸氢二钾1g，加热至75℃，加入1mol/L碳酸钠溶液45mL，煮沸，校正pH7.2～7.4。
4.4.2.6 用滤纸过滤，分装烧瓶，121℃高压灭菌20min。
注：①本培养基不含糖可供作鉴别培养基之基础，不需加蛋白胨和氯化钠。
②1mol/L碳酸钠溶液之配法：无水碳酸钠10.6g，溶于1000mL蒸馏水中。
4.5 豆粉琼脂
4.5.1 成分
牛心消化汤(PH7.4～7.6) 1000mL
琼脂 20g
黄豆粉浸液 50mL
4.5.2 制法
将琼脂加在牛心消化汤内，加热溶解，过滤。加入豌豆粉浸液，分装每瓶100mL，121℃高压灭菌15min。
4.5.2.1 豌豆粉浸液制法：取豌豆粉5g、氯化钠10g，加入蒸馏水100mL。置100℃水浴内加热1h，放于冰箱中过夜。吸取上清液即为豌豆浸液。
4.6 血琼脂
4.6.1 成分
pH7.4～7.6豆粉琼脂 100mL
脱纤维羊血(或兔血) 5～10mL
4.6.2 制法
加热溶化琼脂，冷至50℃，以灭菌手续加入脱纤维羊血，摇匀，倾注平板。亦可分装灭菌试管，置成斜面。亦可用其他营养丰富的基础培养基配制血琼脂。
4.7 营养琼脂
4.7.1 成分
蛋白胨 10g
牛肉膏 3g
氯化钠 5g
琼脂 15～20g
蒸馏水 1000mL
4.7.2 制法
将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内，加入15%氢氧化钠溶液约2mL，校正pH至7.2～7.4。加入琼脂，加热煮沸，使琼脂溶化。分装烧瓶，121℃高压灭菌15min。
注：此培养基可供一般细菌培养之用，可倾注平板或制成斜面。如用于菌落计数，琼脂量为1.5%；如作成平板或斜面，则应为2%。
4.8 营养肉汤
4.8.1 成分
蛋白陈 10g
牛肉膏 3g
氯化钠 5g
蒸馏水 1000mL
pH7.4
4.8.2 制法
按上述成分混合，溶解后校正pH，分装烧瓶，每瓶225mL，121℃高压灭菌15min。
4.9 乳糖胆盐发酵管
4.9.1 成分
蛋白胨 20g
猪胆盐(或牛、羊胆盐) 5g
乳糖 10g
0.04%滇甲酚紫水溶液 25mL
蒸馏水 1000mL
pH7.4
4.9.2 制法
将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，分装每管10mL，并放入一个小倒管，115℃高压灭菌15min。
注：双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外，其他成分加倍。
4.10 乳糖发酵管
4.10.1 成分
蛋白胨 20g
乳糖 10g
0.04%溴甲酚紫水溶液 25mL
蒸馏水 1000mL
pH7.4
4.10.2 制法
将蛋白胨及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，按检验要求分装30mL、10mL或3mL，并放入一个小倒管，115℃高压灭菌15min。
注：①双料乳糖发酵管除蒸馏水外，其他成分加倍。
②30mL和10mL乳糖发酵管专供酱油及酱类检验用，3mL乳糖发酵管供大肠菌群证实试验用。
4.11 EC肉汤
4.11.1 成分
胰蛋白胨 20g
3号胆盐(或混合胆盐) 1.5g
乳糖 5g
磷酸氢二钾 4g
磷酸二氢钾 1.5g
氯化钠 5g
蒸馏水 1000mL
4.11.2 制法
将上述成分混合，溶解后，分装有发酵倒管的试管中，121℃高压灭菌15min，最终pH为6.9±0.2。
4.12 缓冲蛋白胨水(BP)
4.12.1 成分
蛋白胨 10g
氯化钠 5g
磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O) 9g
磷酸二氢钾 1.5g
蒸馏水 1000mL
pH7.2
4.12.2 制法
按上述成分配好后以大烧瓶装，121℃高压灭菌15min。临用时无菌分装每瓶225mL。
注：本培养基供沙门氏菌前增菌用。
4.13 氯化镁孔雀绿增菌液(MM)
4.13.1 甲液
胰蛋白胨 5g
氯化钠 8g
磷酸二氢钾 1.6g
蒸馏水 1000mL
4.13.2 乙液
氯化镁(化学纯) 40g
蒸馏水 100mL
4.13.3 丙液
0.4%孔雀绿水溶液。
4.13.4 制法
分别按上述成分配好后，121℃高压灭菌15min备用。临用时取甲液90mL、乙液9mL、丙液0.9mL，以无菌操作混合即可。
注：本培养基亦称Rappaport 10(R10)增菌液。
4.14 四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB)
4.14.1 基础培养基
多胨或脙胨 5g
胆盐 1g
碳酸钙 10g
硫代硫酸钠 30g
蒸馏水 1000mL
4.14.2 碘溶液
碘 6g
碘化钾 5g
蒸馏水 20mL
4.14.3 制法
将基础培养基的各成分加入蒸馏水中，加热溶解，分装每瓶100mL。分装时应随时振摇，使其中的碳酸钙混匀。121℃高压灭菌15min备用。临用时每100mL基础培养基中加入碘溶液2mL、0.1%煌绿溶液1mL。
4.15 四硫磺酸钠煌绿增菌液(换用方法)
4.15.1 基础液
蛋白胨 10g
牛肉膏 5g
氯化钠 3g
碳酸钙 45g
蒸馏水 1000mL
将各成分加入于蒸馏水中，加热至约70℃溶解，校正pH至7.0±0.1，121℃高压灭菌20min。
4.15.2 硫代硫酸钠溶液
硫代硫酸钠(Na2S2O3·5H2O) 50g
蒸馏水 加至100mL
4.15.3 碘溶液
碘片 20g
碘化钾 25g
蒸馏水加至 100mL
将碘化钾充分溶解于是少量的蒸馏水中，加入碘片，振摇玻瓶至碘片全部溶解，再加入蒸馏水至规定量。贮于棕色玻瓶内，紧塞瓶盖备用。
4.15.4 煌绿水溶液
煌绿 0.5g
蒸馏水 100mL
存放暗处，不少于1d，使其自然灭菌。
4.15.5 牛胆盐溶液
干燥的牛胆盐 10g
蒸馏水 100mL
煮沸溶解，121℃高压灭菌20min。
4.15.6 制备
基础液 900mL
硫代硫酸钠溶液 100mL
碘液 20mL
煌绿溶液 2mL
牛胆盐溶液 50mL
临用前，按上列顺序，以无菌操作依次加入于基础液中，每加入一种成分，均应摇匀后再加入另一种成分。分装于灭菌瓶中，每瓶100mL。
4.16 亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)
4.16.1 成分
蛋白胨 5g
乳糖 4g
亚硒酸氢钠 4g
磷酸氢二钠 5.5g
磷酸二氢钾 4.58
L-胱氨酸 0.01g
蒸馏水 1000mL
4.16.2 1%L-胱氨酸－氢氧化钠溶液的配法：称取L－胱氨酸0.1g(或DL－胱氨酸0.2g)，加1mol/L氢氧化钠1.5mL，使溶解，再加入蒸馏水8.5mL即成。
4.16.3 制法：将除亚硒酸氢钠和L－胱氨酸以外的各成分溶解于900mL蒸馏水中，加热煮沸，俟冷备用。另将亚硒酸氢钠溶解于100mL蒸馏水中，加热煮沸，候冷，以无菌操作与上液混合。再加入1%L－肮氨酸－氢氧化钠溶液1mL。分装于灭菌瓶中，每瓶100mL，pH应为7.0±0.1。
4.17 GN增菌液
4.17.1 成分
胰蛋白胨 20g
葡萄糖 1g
甘露醇 2g
柠檬酸钠 5g
去氧胆酸钠 0.5g
磷酸氢二钾 4g
磷酸二氢钾 1.5g
氯化钠 5g
蒸馏水 1000mL
pH7.0
4.17.2 制法
按上述成分配好，加热使溶解，校正pH。分装每瓶225mL，115℃高压灭菌15min。
4.18 肠道菌增菌肉汤
4.18.1 成分
蛋白胨1 10g
葡萄糖 5g
牛胆盐 20g
磷酸氢二钠 8g
磷酸二氢钾 2g
煌绿 0.015g
蒸馏水 1000mL
pH7.2
4.18.2 制法
按上述成分配好，加热使溶解，校正pH。分装每瓶30mL，115℃高压灭菌15min。
4.19 亚硫酸铋琼脂(BS)
4.19.1 成分
蛋白胨 10g
牛肉膏 5g
葡萄糖 5g
硫酸亚铁 0.3g
磷酸氢二钠 4g
煌绿 0.025g
柠檬酸铋铵 2g
亚硫酸钠 6g
琼脂 18～20g
蒸馏水 1000mL
pH7.5
4.19.2 制法
4.19.2.1 将前面5种成分溶解于300mL蒸馏水中。
4.19.2.2 将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠另用50mL蒸馏水溶解。
4.19.2.3 将琼脂于600mL蒸馏水中煮沸溶解，冷至80℃
4.19.2.4 将以上三液合并，补充蒸馏水至1000mL，校正pH，加0.5%煌绿水溶液5mL，摇匀。冷至50～55℃，倾注平皿。
注：此培养基不需高压灭菌。制备过程不宜过分加热.以免降低其选择性。应在临用前一天制备，贮存于室温暗处。
超过48h不宜使用。
4.20 DHL琼脂(Deoxycholate Hydrogen Sulfide Lactose Agar)
4.20.1 成分
蛋白胨 20g
牛肉膏 3g
乳糖 10g
蔗糖 10g
去氧胆酸钠 1g
硫代硫酸钠 2.3g
柠檬酸钠 1g
柠檬酸铁铵 1g
中性红 0.03g
琼脂 18～20g
蒸馏水 1000mL
pH7.3
4.20.2 制法
将除中性红和琼脂以外的成分溶解于400mL蒸馏水中，校正pH。再将琼脂于600mL蒸馏水中煮沸溶解，两液合并，并加入0.5%中性红水溶液6mL，待冷至50～55℃，倾注平板。
4.21 HE琼脂(Hektoen Enteric Agar)
4.21.1 成分
脙胨 12g
牛肉膏 3g
乳糖 12g
蔗糖 12g
水杨素 2g
胆盐 20g
氯化钠 5g
琼脂 18～20g
蒸馏水 1000mL
0.4%溴麝香草酚蓝溶液 16mL
Andrade指示剂 20mL
甲液 20mL
乙液 20mL
pH7.5
4.21.2 制法
将前面七种成分溶解于400mL蒸馏水内作为基础液；将琼脂加入于600mL蒸馏水内，加热溶解。加入甲液和乙液于基础液内，校正pH。再加入指示剂，并与琼脂液合并，待冷至50～55℃，倾注平板。
注：①此培养基不可高压灭菌。
②甲液的配制
硫代硫酸钠 34g
柠檬酸铁铵 4g
蒸馏水 100mL
②乙液的配制
去氧胆酸钠 10g
蒸馏水 100mL
②Andrade指示剂
酸性复红 0.5g
1mol/L氢氧化钠溶液 16mL
蒸馏水 100mL
将复红溶解于蒸馏水中，加入氢氧化钠溶液。数小时后如复红褪色不全，再加氢氧化钠溶液1～2mL。
4.22 SS琼脂
4.22.1 基础培养基
牛肉膏 5g
脙胨 5g
三号胆盐 3.5g
琼脂 17g
蒸馏水 1000mL
再将两液混合，121℃高压灭菌15min，保存备用。
4.22.2 完全培养基
基础培养基 100mL
乳糖 10g
柠檬酸钠 8.5g
硫代硫酸钠 8.5g
10%柠檬酸铁溶液 10mL
1%中性红溶液 2.5mL
0.1%煌绿溶液 0.33mL
加热溶化基础培养基，按比例加入上述染料以外之各成分，充分混合均匀，校正至pH7.0，加入中性红和煌绿溶液，倾注平板。
注：①制好的培养基宜当日使用，或保存于冰箱内于48h内使用。
②煌绿溶液配好后应在10d以内使用。
③可以购用SS琼脂的干燥培养基。
4.23 Ws琼脂
4.23.1 成分
②胨 12g
牛肉膏 3g
氯化钠 5g
乳糖 12g
蔗糖 12g
十二烷基硫酸钠 2g
琼脂 15g
Andrade指示剂 20mL
0.4%溴麝香草酚蓝溶液 16mL
甲液 20mL
蒸馏水 1000mL
pH7.0
4.23.2 制法
除指示剂和甲液外，将其他成分加热溶解，不需消毒，校正pH后加入指示剂和甲液，倾注平板应呈草绿色。
注：①供沙门氏菌分离用。
②Andrade指示剂和甲液的配制均见HE琼脂。
4.24 麦康凯琼脂
4.24.1 成分
蛋白胨 17g
脙胨 3g
猪胆盐(或牛、羊胆盐) 5g
氯化钠 5g
琼脂 17g
蒸馏水 1000mL
乳糖 10g
0.01%结晶紫水溶液 10mL
0.5%中性红水溶液 5mL
4.24.2 制法
4.24.2.1 将蛋白胨、胨、胆盐和氯化钠溶解于400mL蒸馏水中，校正pH7.2。将琼脂加入600mL蒸馏水中，加热溶解。将两液合并，分装于烧瓶内，121℃高压灭菌15min备用。
4.24.2.2 临用时加热溶化琼脂，趁热加入乳糖，冷至50～55℃时，加入结晶紫和中性红水溶液，摇匀后倾注平板。
注：结晶紫及中性红水溶液配好后须经高压灭菌。
4.25 伊红美蓝琼脂(EMB)
4.25.1 成分
蛋白胨 10g
乳糖 10g
磷酸氢二钾 2g
琼脂 17g
2%伊红Y溶液 20mL
0.65%美蓝溶液 10mL
蒸馏水 1000mL
pH7.1
4.25.2 制法
将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正PH，分装于烧瓶内，121℃高压灭菌15min备用。临用时加入乳糖并加热溶化琼脂，冷至50～55℃，加入伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板。
4.26 三糖铁琼脂(TSI)
4.26.1 成分
蛋白胨 20g
牛肉膏 5g
乳糖 10g
蔗糖 10g
葡萄糖 1g
氯化钠 5g
硫酸亚铁铵〔e(NH4)2(SO4)2·6H2O〕 0.2g
硫代硫酸钠 0.2g
琼脂 12g
酚红 0.025g
蒸馏水 1000mL
pH7.4
4.26.2 制法
将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pH。加入琼脂，加热煮沸，以溶化琼脂。加入0.2%酚红水溶液12.5mL，摇匀。分装试管，装量宜多些，以便得到较高的底层。121℃高压灭菌15min。放置高层斜面备用。
4.27 三糖铁琼脂(换用方法)
4.27.1 成分
蛋白胨 15g
脙胨 5g
牛肉膏 3g
酵母膏 3g
乳糖 10g
蔗糖 10g
葡萄糖 1g
氯化钠 5g
硫酸亚铁 0.2g
硫代硫酸钠 0.3g
琼脂 12g
酚红 0.025g
蒸馏水 1000mL
pH7.4
4.27.2 制法
将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pH。加入琼脂，加热煮沸，以溶化琼脂。加入0.2%酚红水溶液12.5mL，摇匀。分装试管，装量宜多些，以便得到较高的底层。121℃高压灭菌15min，放置高层斜面备用。
4.28 克氏双糖铁琼脂(KI)
4.28.1 上层培养基成分
血消化汤(PH7.6) 500mL
琼脂 6.5g
硫代硫酸钠 0.1g
硫酸亚铁铵 0.1g
乳糖 5g
0.2%酚红溶液 5mL
4.28.2 下层培养基成分
血消化汤(pH7.6) 500mL
琼脂 2g
葡萄糖 1g
0.2%酚红溶液 5mL
4.28.3 制法
4.28.3.1 取血消化汤按上层和下层的琼脂用量，分别加入琼脂，加热溶解。
4.28.3.2 分别加入其他各种成分。将上层培养基分装于烧瓶内；将下层培养基分装于灭菌12mm×100mm试管内，每管约2mL。115℃高压灭菌10min。
4.28.3.3 将上层培养基放在56℃水浴箱内保温；将下层培养基直立放在室温内，使其凝固。
4.28.3.4 俟下层培养基凝固后，以无菌手续将上层培养基分装于下层培养基的上面，每管约1.5mL，放成斜面。
4.29 克氏双糖铁琼脂(换用方法)
4.29.1 成分
蛋白胨 20g
牛肉膏 3g
酵母膏 3g
乳糖 10g
葡萄糖 1g
氯化钠 5g
柠檬酸铁铵 0.5g
硫代硫酸钠 0.5g
琼脂 12g
酚红 0.025g
蒸馏水 1000mL
pH7.4
4.29.2 制法
将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pH。加入琼脂，加热煮沸，以溶化琼脂。加入0.2%酚红水溶液12.5mL，摇匀。分装试管，装量宜多些，以便得到比较高的底层。121℃高压灭菌15min。放置高层斜面备用。
4.30 半固体琼脂
4.30.1 成分
蛋白胨 1g
生肉膏 0.3g
氯化钠 0.5g
琼脂 0.35～0.4g
蒸馏水 100mL
pH7.4
4.30.2 制法
按以上成分配好，煮沸使溶解，并校正pH。分装小试管。121℃高压灭菌15min。直立凝固备用。
注：供动力观察、菌种保存、H抗原位相变异试验等用。
4.31 葡萄糖半固体发酵管
4.31.1 成分
蛋白胨 1g
牛肉膏 0.3g
氯化钠 0.5g
1.6%溴甲酚紫酒精溶液 0.1mL
葡萄糖 1g
琼脂 0.3g
蒸馏水 100mL
pH7.4
4.31.2 制法
将蛋白胨、牛肉膏和氯化钠加入于水中，校正pH后加入琼脂加热溶解，再加入指示剂和葡萄糖，分装小试管，灭菌121℃ 15 min。
4.32 5%乳糖发酵管
4.32.1 成分
蛋白胨 0.2g
氯化钠 0.5g
乳糖 5g
2%溴麝香草酚蓝水溶液 1.2mL
蒸馏水 100mL
pH7.4
4.32.2 制法
除乳糖以外的各成分溶解于50mL蒸馏水内，校正pH。将乳糖溶解于另外50mL蒸馏水内，分别灭菌121℃ 15min，将两液混合，以无菌操作分装于灭菌小试管内。
注：在此培养基内，大部分乳糖迟缓发酵的细菌可于1d内发酵。
4.33 CAYE培养基
此培养基附在肠毒素诊断试剂盒内，如无此培养基，亦可用Honda氏产毒肉汤。
4.34 Honda氏产毒肉汤
4.34.1 成分
水解酪蛋白 20g
酵母浸膏粉 10g
氯化钠 2.5g
磷酸氢二钠 15g
葡萄糖 5g
微量元素 0.5mL
蒸馏水 1000mL
pH7.5
4.34.2 制法
溶解后校正pH，高压灭菌121℃ 15min，待冷至45～50℃时，加入林可霉素溶液，每毫升培养基内含90μg。
4.34.3 微量元素配方
硫酸镁 5g，氯化铁 0.5g，氯化钻 2g，蒸馏水 100mL
4.35 Elek氏培养基(毒素测定用)
4.35.1 成分
胨 20g
麦芽糖 3g
乳糖 0.7g
氯化钠 5g
琼脂 15g
40%氢氧化钠溶液 1.5mL
蒸馏水 1000mL
pH7.8
4.35.2 制法
用500mL蒸馏水溶解琼脂以外的成分，煮沸，并用滤纸过滤。用1mo1/L氢氧化钠校正pH。用另外500mL蒸馏水加热溶解琼脂。将两液混合，分装试管10mL或20mL。121℃高压灭菌15min。临用时加热溶化琼脂倾注平板。
4.36 氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基
4.36.1 甲液：胰蛋白胨 10g
蒸馏水 1000mL
乙液：磷酸氢二钠 9.5g
蒸馏水 1000mL
丙液：氯化镁(MgCl2·6H2O) 40g
蒸馏水 400mL
以上分别在121℃灭菌15min。
丁液：孔雀绿 0.2g
蒸馏水 100mL
戊液：羧苄青霉素 1mg/mL
4.36.2 制法
取甲液620mL、乙液160mL、丙液212mL混合，再加入丁液6.4mL和戊液2.4mL，即为1000mL培养基。分装灭菌烧瓶，每瓶100mL，或灭菌试管10mL。
4.37 胰蛋白胨水
4.37.1 成分
胰蛋白胨 10g
蒸馏水 1000mL
pH7.0
4.37.2 制法
将上述成分溶解，校正pH。分装试管，121℃高压灭菌15min。
4.38 Rustigian氏尿素培养液
4.38.1 成分
尿素 20.0g
酵母浸膏 0.1g
磷酸二氢钾(KH2PO4) 0.091g
磷酸氢二钠(Na2HPO4) 0.095g
酚红 0.01g
蒸馏水 1000mL
4.38.2 制法
将上述成分于蒸馏水中溶解，校正pH为6.8±0.2。不要加热，过滤除菌，无菌分装于灭菌小试管中，每管为约3mL。
4.38.3 用途
尿素酶试验用。
4.39 氯化钠结晶紫增菌液
4.39.1 成分
蛋白胨 20g
氯化钠 40g
0.01%结晶紫溶液 5mL
蒸馏水 1000mL
pH9.0
4.39.2 制法
胨晶晶紫外，其他按上述成分配好，加热溶解。约加30%氢氧化钾溶液4.5mL，校正pH。加热煮沸，过滤。再加入结晶紫溶液，混合后分装试管。121℃高压灭菌15min。
4.40 氯化钠蔗糖琼脂
4.40.1 成分
蛋白胨 10g
牛肉膏 10g
氯化钠 50g
蔗糖 10g
琼脂 18g
0.2%溴麝香草酚蓝溶液 20mL
蒸馏水 1000mL
pH7.8
4.40.2 制法
将牛肉膏、蛋白胨及氯化钠溶解于蒸馏水中，校正pH。加入琼脂，加热溶解，过滤。加入指示剂，分装烧瓶100mL。121℃高压灭菌15min备用。临用前在100mL培养基内加入蔗糖1g，加热溶化并冷至50℃，倾注平板。
4.41 嗜盐菌选择性琼脂
4.41.1 成分
蛋白胨 20g
氯化钠 40g
琼脂 17g
0.01%结晶紫溶液 5mL
蒸馏水 1000mL
pH8.7
4.41.2 制法
除结晶紫和琼脂外，其他按上述成分配好，校正pH。加入琼脂，加热溶解。再加入结晶紫溶液，分装烧瓶，每瓶100mL。
4.42 3.5%氯化钠三糖铁琼脂
4.42.1 成分
三糖铁琼脂 1000mL
氯化钠 30g
4.42.2 制法
按4.26或4.27配制三糖铁琼脂，再加入氯化钠30g，分装试管，121℃高压灭菌15min。放置高层斜面备用。
4.43 氯化钠血琼脂
4.43.1 成分
酵母膏 3g
蛋白胨 10g
氯化钠 70g
磷酸氢二钠 5g
甘露醇 10g
结晶紫 0.001g
琼脂 15g
蒸馏水 1000mL
4.43.2 制法
调pH8.0加热30min(不必高压)，待冷至45℃左右时，加入新鲜人或兔血(5%～10%)混合均匀，倾注平皿。
4.44 嗜盐性试验培养基
4.44.1 成分
蛋白胨 2g
氯化钠 按不同量加
蒸馏水 100mL
pH7.7
4.44.2 制法
配制2%蛋白胨水，校正pH，共配制5瓶，每瓶100mL。每瓶分别加入不同量的氯化钠：(1)不加；(2)3g；(3)7g；(4)9g；(5)11g。待溶解后分装试管。121℃高压灭菌15min。
4.45 3.5%氯化钠生化试验培养基
4.45.1 成分及制法
根据所需糖的种类按3.2配制。只是将氯化钠含量改为3.5%，pH为7.7。
4.46 改良磷酸盐缓冲液(小肠结肠炎耶尔森氏菌专用)
4.46.1 成分
磷酸氢二钠(Na2HPO4 8.23g
磷酸二氢钠(NaH2PO4·H2O) 1.2g
氯化钠(NaCl) 5.0g
三号胆盐 1.5g
山梨醇 20g
4.46.2 制法
将磷酸盐及氯化钠溶于蒸馏水中，再加入三号胆盐及山梨醇，溶解后校正pH为7.6，分装试管，于121℃高压灭菌15min，备用。
4.47 CIN－1培养基
4.47.1 基础培养基
胰胨 20.0g
酵母浸膏 2.0g
甘露醇 20.0g
氯化钠 1.0g
去氧胆酸钠 2.0g
硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.01g
琼脂 12.0g
蒸馏水 950mL
pH7.5±0.1
将基础培养基高压灭菌。
4.47.2 Irgasan：以95%的乙醇作溶剂，溶解二苯醚，配成0.4%的溶液，待基础液冷至80℃时，加入1mL混匀。
4.47.3 冷至50℃时，加入：
中性红(3mg/mL) 10.0mL
结晶紫(0.1mg/mL) 10.0mL
头孢菌素(1.5mg/mL) 10.0mL
新生霉素(0.25mg/mL) 10.0mL
最后不断搅拌着加入10.0mL的10%氯化锶，倒平皿。
4.48 改良Y培养基
4.48.1 成分
蛋白胨 15.0g
氯化钠 5.0g
乳糖 10.0g
草酸钠 2.0g
去氧胆酸钠 6.0g
三号胆盐 5.0g
丙酮酸钠 2.0g
孟加拉红 40mg
水解酪蛋白 5.0g
琼脂 17.0g
蒸馏水 1000mL
4.48.2 制法
将上述成分混合，于121℃高压灭菌15min，待冷至45℃左右时，倾注平皿。最终pH7.4±0.1。
4.49 改良克氏双糖
4.49.1 成分
蛋白胨 20g
牛肉膏 3g
酵母膏 3g
山梨醇 20g
葡萄糖 1g
氯化钠 5g
柠檬酸铁铵 0.5g
硫代硫酸钠 0.5g
琼脂 12g
酚红 0.025g
蒸馏水 1000mL
pH7.4
4.49.2 制法
将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pH。加入0.02%酚红水溶液12.5mL，摇匀。分装试管，装量宜多些，以便得到比较高的底层。121℃高压灭菌15min，放置高层斜面备用。
4.50 快速硫化氢(H2S)试验琼脂
4.50.1 制法
A液：布氏杆菌肉汤 970mL
无水磷酸氢二钠 1.18g
无水磷酸二氢钾 0.23g
琼脂 2g
加热溶解，高压灭菌，121℃ 15min。加入B液10%硫酸亚铁(含7H2O)，C液10%偏亚硫酸氢钠，D液10%丙酮酸钠。
4.50.2 上述B、C、D溶液均新鲜配制，用除菌滤膜过滤。将此除菌溶液各1mL混合后再入A液中，无菌调pH到7.3，无菌分装，每管3mL，塞紧备用。
4.51 DNA酶甲基绿琼脂(DTA)
4.51.1 成分
DNA 2.0g
植物蛋白胨 5.0g
胰蛋白胨 15.0g
氯化钠 5.0g
琼脂(1.5%) 15.0g
蒸馏水 1000mL
pH7.3
4.51.2 制法
称取各成分后，加水徐徐加热，避免形成饼溶性丝状物，121℃ 15min高压。
4.51.3 甲基绿配制(MG)
配制0.5%的甲基绿水溶液。用等体积氯仿作5～7次抽提，直到氯仿层无色为止。过滤除菌，置4℃保存。
4.51.4 每100mL灭菌溶化的DTA培养基加1mL(MG)染料液，甲基绿最终浓度为0.005%。
4.52 Cary－Blair氏运送培养基
4.52.1 成分
硫乙醇酸钠 1.5g
磷酸氢二钠 1.1g
氯化钠 5g
琼脂 5g
蒸馏水 1000mL
1%氯化钙溶液 9mL
pH8.4
4.52.2 制法
除氯化钙外，其他均按上述成分配制，加热溶解。冷至50℃，加入氯化钙溶液，校正pH到8.4。分装试管，每支5mL，或注入具有胶塞的瓶内。121℃高压灭菌15min。
4.52.3 用途
作空肠弯曲杆菌、霍乱弧菌、沙门氏菌、志贺氏菌采样时用。
注：在该采样管中的标本，只能保存72h。
4.53 改良Camp－BAP培养基
4.53.1 成分
胰蛋白胨 10.0g
蛋白胨 10.0g
葡萄糖 1.0g
酵母浸膏 2.0g
氯化钠 5.0g
焦亚硫酸钠 0.1g
琼脂 15.0g
蒸馏水 1000mL
硫乙醇酸钠 1.5g
万古霉素 10mg
多粘菌素B 2500 国际单位
两性霉素B(Amphotericin B) 2mg
头孢霉素(Cephalosporin，亦可用ceporan) 15mg
脱纤维羊血 50mL
4.53.2 制法
4.53.2.1 除抗生素和羊血外，将其他成分混合，加热溶解，校正pH到7.0±0.2。装瓶，每瓶100mL。121℃高压灭菌15min，备用。此为布氏琼脂基础培养基。
4.53.2.2 临用前，加热溶解基础琼脂，冷至60℃。每100mL基础琼脂中，加入脱纤维羊血5mL、抗生素混合液0.5mL及两性霉素B。头孢霉素混合液0.5mL，摇匀，倾注平板。
4.53.3 说明
4.53.3.1 两性霉素B、头孢霉素混合液配法：称两性霉素B2mg和头孢霉素15mg与无菌蒸馏水5mL混合即成。
4.53.3.2 称量抗生素必须正确，操作必须小心慎重。
4.54 Skirrow氏培养基
4.54.1 成分
蛋白胨 15.0g
胰蛋白胨(tryptone) 2.5g
酵母浸膏 5.0g
氯化钠 5.0g
琼脂 15.0g
蒸馏水 1000.0mL
甲氧苄氨嘧啶(trimethoprim，TMP) 5.0mg
万古霉素(vancomycin) 10.0mg
多粘菌素B(polymyxin) 2500.0国际单位
冻溶马血 70.0mL
4.54.2 制法
4.54.2.1 除甲氧苄氨嘧啶、抗生素和冻溶马血外，将其他成分混合溶解。校正pH7.4，装瓶100mL。121℃高压灭菌15min，备用。此即血琼脂基础培养基。
4.54.2.2 临用前，加热溶解基础培养基，冷至60℃。每100mL基础培养基中，加入冻溶两次的马血7mL及TMP、抗生素混合液0.5mL，摇匀，倾注无菌平板。
4.54.3 用途
分离空肠弯曲菌之用。
4.54.4 说明
4.54.4.1 TMP、抗生素混合液配法：先配成乳酸TMP溶液，以乳酸62mg(约1～2滴)混合于100mL灭菌蒸馏水中，然后再加入TMP溶液。
取乳酸TMP溶液5mL，再加入万古霉素及多粘菌素B，摇匀后，即成TMP抗生素混合液。
4.54.4.2 TMP、抗生素的作用
4.54.4.2.1 TMP(甲氧苄氨嘧啶，又称磺胺增效剂或抗菌增效剂)：为广谱抗菌剂，其抗菌谱与磺胺嘧啶相似，但对链球菌及大多数革兰氏阴性菌的抗菌作用较磺胺嘧啶强，与抗生素合用有协同作用，能增加杀菌和抑菌作用。
4.54.4.2.2 万古霉素：是窄谱抗菌素，仅对革兰氏阳性菌有较强的杀菌和抑菌作用，如溶血性链球菌、草绿色链球菌、肠球菌、金黄色葡萄球菌等。
4.54.4.2.3 多粘菌素B：仅限于对革兰氏阴性菌，如对产气杆菌、流感杆菌、痢疾杆菌等。
4.54.4.2.4 TMP和抗生素称量必须正确，操作必须慎重小心。
4.55 TTC琼脂
4.55.1 成分
胰蛋白胨(tryptone) 17.0g
大豆胨 3.0g
葡萄糖 6.0g
氯化钠 2.5g
硫乙醇酸钠 0.5g
琼脂 15.0g
L－胱氨酸－盐酸(L－Cys·HCl) 0.25g
亚硫酸钠 0.1g
1%氯化血红素溶液 0.5mL
1%维生素K1溶液 0.1mL
2，3，5－氯化三苯四氮唑(TTC) 0.4g
蒸馏水 1000mL
4.55.2 制法
4.55.2.1 除1%氯化血红素、维生素K1和TTC外，将其他成分混合，加热溶解。L－胱氨酸先用少量氢氧化钠溶解后加入，校正pH7.2，然后加入预先配成的氯化血红素和维生素K1，充分摇匀。装瓶，每瓶100mL。121℃高压灭菌15min，备用。
4.55.2.2 临用前，溶解基础琼脂，每100mL基础培养基中，加入TTC40mg，充分摇匀，倾注无菌平板。
4.55.3 说明
4.55.3.1 将可疑空肠弯曲菌接种于平板上，在微氧环境下，于43℃培养48h。阳性菌落呈紫红色，空肠弯曲菌呈阳性反应；胎儿和肠道弯曲菌呈阴性反应。
4.55.3.2 1%氯化血红素溶液和1%维生素K1溶液配法：称取氯化血红素1g和1mol/L氢氧化钠5mL混合。再用蒸馏水稀释到100mL，即为1%氯化血红素溶液。
称取维生素K11g和纯乙醇99mL混合，或用维生素K1针剂。
4.56 甘氨酸培养基
4.56.1 成分
布氏(Brucella)肉汤 1000mL
琼脂 1.6g
甘氨酸(glycine)(又称氨基乙酸aminoacetic acid) 10.0g
4.56.2 制法
将以上成分混合，加热溶解，校正pH7.0±0.2，分装13mm×100mm试管，每支约4mL左右，121℃高压灭菌15min，备用。
4.56.3 说明
空肠弯曲菌对甘氨酸有耐受性，穿刺接种于甘氨酸培养基中，置于微需氧环境下，在43℃培养48h。在培养基表面出现云雾状现象为阳性，胎儿弯曲菌空肠亚种为阳性结果。
4.57 改良磷酸盐缓冲液
4.57.1 成分
磷酸氢二钠(Na2HPO4) 8.23g
磷酸二氢钠(NaH2PO4·H2O) 1.20g
氯化钠(NaCl) 5.0g
蒸馏水 1000.0mL
山梨醇 10.0g
胆盐 1.5g
4.57.2 制法
将磷酸盐及氯化钠溶于蒸馏水中，再加入山梨醇及胆盐，溶解后，校正pH为7.6，分装试管。于121℃高压灭菌15min，备用。
4.58 氯化镁孔雀绿肉汤
4.58.1 成分
1%胰胨水(高压灭菌) 156mL
1/15mo1/L磷酸氢二钠(Na2HPO4)溶液(高压灭菌) 40mL
40%(m/V)氯化镁(MgCl2·6H2O)水溶液(100℃煮沸数分钟) 53mL
0.2%孔雀绿溶液 1.6mL
4.58.2 制法
将上述几种溶液按列出的容量混合，即成氯化镁孔雀绿肉汤。分装试管，每管10mL，于4℃可保存10个月。如若配氯化镁孔雀绿羧节青霉素肉汤，除上述几种溶液外，再配制羧节青霉素(carpenicillin)溶液(溶解1mg于1mL水中)，将此溶液与其他溶液混合，即成。
4.59 胰酪胨大豆肉汤
4.59.1 成分
胰酪胨(或胰蛋白胨) 17g
植物蛋白胨(或大豆蛋白胨) 3g
氯化钠 100g
磷酸氢二钾 2.5g
葡萄糖 2.5g
蒸馏水 1000mL
4.59.2 制法
将上述成分混合，加热并轻轻搅拌并溶解，分装后，121℃高压灭菌15min，最终pH7.3±0.2。
4.60 Baird－Parker氏培养基
4.60.1 成分
胰蛋白胨 10g
牛肉膏 5g
酵母膏 1g
丙酮酸钠 10g
甘氨酸 12g
氯化锂(LiCl·6H2O) 5g
琼脂 20g
蒸馏水 950mL
PH7.5
4.60.2 增菌剂的配法
30%卵黄盐水50mL与除菌过滤的1%亚蹄酸钾溶液10mL混合，保存于冰箱内。
4.60.3 制法
将各成分加到蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解。冷至25℃，校正pH。分装每瓶95mL，121℃高压灭菌15min。临用时加热溶化琼脂，冷至50℃，每95mL加入预热至50℃的卵黄亚蹄酸钾增菌剂5mL，摇匀后倾注平板。培养基应是致密不透明的。使用前在冰箱储存不得超过48h。
4.61 7.5%氯化钠肉汤
4.61.1 成分
蛋白胨 10g
牛肉膏 3g
氯化钠 75g
蒸馏水 1000mL
pH7.4
4.61.2 制法
将上述成分加热溶解，校正pH，分装试管，121℃高压灭菌15min。
4.62 匹克氏肉汤
4.62.1 成分
含1%胰蛋白胨的牛心浸液 200mL
1：25000结晶紫盐水溶液 10mL
1：800三氮化钠溶液 10mL
脱纤维兔血(或羊血) 10mL
4.62.2 制法
将上述已灭菌的各种成分，用无菌手续依次混合，分装于无菌试管内，每管约2mL，保存于冰箱内备用。
4.63 3.8%柠檬酸钠溶液
4.63.1 成分
柠檬酸钠 3.8g
蒸馏水 100mL
4.63.2 制法
取柠檬酸钠3.8g，加蒸馏水到100mL，溶解后过滤，装瓶，121℃高压灭菌15min。
注：兔(人)血浆制备：取3.8%柠檬酸钠溶液一份加兔(或人)全血四份，混好静置之，则血球下降，即可得血浆进行试验。
4.64 甘露醇卵黄多粘菌素琼脂
4.64.1 成分
蛋白胨 10g
牛肉膏 1g
甘露醇 10g
氯化钠 10g
琼脂 15g
蒸馏水 1000mL
0.2%酚红溶液 13mL
50%卵黄液 50mL
多粘菌素B 100 国际单位/mL
pH7.4
4.64.2 制法
将前面五种成分加入于蒸馏水中，加热溶解，校正pH，加入酚红溶液。分装烧瓶，每瓶100mL，121℃高压灭菌15min。临用时加热溶化琼脂，冷至50℃，每瓶加入50%卵黄液5mL及多粘菌素B10000国际单位，混匀后倾注平板。
4.65 酪蛋白琼脂
4.65.1 成分
酪蛋白 10g
牛肉膏 3g
磷酸氢二钠 2g
氯化钠 5g
琼脂 15g
蒸馏水 1000mL
0.4%溴麝香草酚蓝溶液 12.5mL
pH7.4
4.65.2 制法
将除指示剂外的各成分混合，加热溶解(但酪蛋白不溶解)，校正pH。加入指示剂，分装烧瓶，121℃高压灭菌15min。临用时加热溶化琼脂，冷至50℃，倾注平板。
注：将菌株划线接种于平板上，如沿菌落周围有透明圈形成，即为能水解酪蛋白。
4.66 木糖－明胶培养基
4.66.1 成分
胰胨 10g
酵母膏 10g
木糖 10g
磷酸氢二钠 5g
明胶 120g
蒸馏水 1000mL
0.2%酚红溶液 25mL
pH7.6
4.66.2 制法
将除酚红以外的各成分混合，加热溶解，校正pH。加入酚红溶液，分装试管，121℃高压灭菌15min，迅速冷却。
4.67 庖肉培养基
4.67.1 成分
牛肉浸液 1000mL
蛋白胨 30g
酵母膏 5g
磷酸二氢钠 5g
葡萄糖 3g
可溶性淀粉 2g
碎肉渣适量
pH7.8
4.67.2 制法
4.67.2.1 称取新鲜除脂肪和筋膜的碎牛肉500g，加蒸馏水1000mL和1mol/L氢氧化钠溶液25mL，搅拌煮沸15min，充分冷却，除去表层脂肪，澄清，过滤，加水补足至1000mL。加入除碎肉渣外的各种成分，校正pH。
4.67.2.2 碎肉渣经水洗后晾至半干，分装15mm×150mm试管约2～3cm高，每管加入还原铁粉0.1～0.2g或铁屑少许。将上述液体培养基分装至每管内超过肉渣表面约1cm。上面覆盖溶化的凡士林或液体石蜡0.3～0.4cm。121℃高压灭菌15min。
4.68 卵黄琼脂培养基
4.68.1 成分
4.68.1.1 基础培养基
肉浸液 1000mL
蛋白胨 15g
氯化钠 5g
琼脂 25～30g
pH7.5
4.68.1.2 50%葡萄糖水溶液。
4.68.1.3 50%卵黄盐水悬液。
4.68.2 制法
制备基础培养基，分装每瓶100mL。121℃高压灭菌15min。临用时加热溶化琼脂，冷至50℃，每瓶内加入50%葡萄糖水溶液2mL和50%卵黄盐水悬液10～15mL，摇匀，倾注平板。
4.69 亚硫酸盐－多粘菌素－磺胺嘧啶琼脂(SPS)
4.69.1 成分
胰酶消化酪蛋白胨 15g
酵母膏 10g
柠檬酸铁 0.5g
琼脂 15g
蒸馏水 1000mL
10%亚硫酸钠水溶液(新配) 5mL
0.12%多粘菌素B硫酸盐水溶液 10mL
1.2%磺胺嘧啶钠水溶液 10mL
pH7.0
4.69.2 制法：前面五种成分配合后加热溶解，校正pH。分装每瓶100mL，121C高压灭菌15min。临
用时加热溶化琼脂，冷至50℃。按比例加入后3种溶液，摇匀，倾注平板。
4.70 液体硫乙醇酸盐培养基(FT)
4.70.1 成分
胰酶消化酪蛋白胨 15g
L－胱氨酸 0.5g
葡萄糖 5g
酵母膏 5g
氯化钠 2.5g
硫乙醇酸钠 0.5g
刃天青(Resazurin) 0.001g
琼脂 0.75g
蒸馏水 1000mL
pH7.1
4.70.2 制法
煮沸溶解，冷却后校正pH，分装试管，每管10mL，121℃高压灭菌15min。临用前隔水煮沸10min，以驱除培养基中溶解的氧气，迅速冷却。
4.71 含铁牛奶培养基
4.71.1 成分
新鲜全脂年奶 1000mL
硫酸亚铁 1g
蒸馏水 50mL
4.71.2 制法
将硫酸亚铁溶解于蒸馏水中，不断搅拌，缓慢地加入于1000mL牛奶中，混匀。分装试管，每管10mL，121℃高压灭菌15min。本培养基必须新鲜设备。
4.72 动力-硝酸盐培养基（A法）
4.72.1 成分
蛋白胨 5g
牛肉膏 3g
硝酸钾 1g
琼脂 3g
蒸馏水 1000mL
pH7.0
4.72.2 制法
加热溶解，校正pH。分装试管，每管10mL，121℃高压灭菌15min。
4.73 动力－硝酸盐培养基(B法)
4.73.1 成分
蛋白胨 5g
牛肉膏 3g
销酸钾 5g
磷酸氢二钠 2.5g
半乳糖 5g
甘油 5g
琼脂 3g
蒸馏水 1000mL
pH7.4
4.73.2 制法
将以上各成分混合，加热溶解，校正pH。分装试管，121℃高压灭菌15min。
4.74 血清肉汤
在肉浸液肉汤(3.1)中按10∶1以无菌操作加马(或羊、兔)血清即为血清肉汤。
4.75 马丁氏肉汤
4.75.1 成分
蛋白胨液 500mL
肉浸液 500mL
冰乙酸 6g
葡萄糖 10g
4.75.2 制法
4.75.2.1 将蛋白胨液500mL与肉浸液500mL混合，加热至80℃，加冰乙酸1mL，摇匀，再煮沸5min。
4.75.2.2 加15%氢氧化钠溶液约20mL，校正pH至7.2。
4.75.2.3 加乙酸钠6g，再校正pH至7.2。
4.75.2.4 继续煮沸10min，用滤纸过滤。在每1000mL肉汤内，再加葡萄糖10g。然后装瓶，每瓶500mL。放置高压灭菌器内经121℃灭菌15min，备用。
注：蛋白胨液的制备：取新鲜猪胃，去脂绞碎。称取350g加50℃左右蒸馏水1000mL，充分摇匀。再加盐酸(化学纯，比重1.19)10mL，经充分混合后，置56℃温箱中消化24h(每小时搅拌1～2次)，消化完毕后，加热，用滤纸过滤，备用。
4.76 明胶培养基
4.76.1 成分
蛋白胨 5g
牛肉膏 3g
明胶 120g
蒸馏水 1000mL
4.76.2 制法
将上述成分混合，置流动蒸气灭菌器内，加热溶解，校正pH至7.0～7.2，用绒布过滤。分装试管，121℃灭菌15min，备用。
4.77 察氏培养基
4.77.1 成分
硝酸钠 3g
磷酸氢二钾 1g
硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.5g
氯化钾 0.5g
硫酸亚铁 0.01g
蔗糖 30g
琼脂 20g
蒸馏水 1000mL
4.77.2 制法
加热溶解，分装后121℃灭菌20min。
4.77.3 用途
青霉、曲霉鉴定及保存菌种用。
4.78 高盐察氏培养基
4.78.1 成分
硝酸钠 2g
磷酸二氢钾 1g
硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.5g
氯化钾 0.5g
硫酸亚铁 0.01g
氯化钠 60g
蔗糖 30g
琼脂 20g
蒸馏水 1000mL
4.78.2 制法
加热溶解，分装后，115℃高压灭菌30min。必要时，可酌量增加琼脂。
4.78.3 用途
分离霉菌用。
4.79 马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)
4.79.1 成分
马铃薯(去皮切块) 300g
葡萄糖 20g
琼脂 20g
蒸馏水 1000mL
4.79.2 制法
将马铃薯去皮切块，加1000mL蒸馏水，煮沸10～20min。用纱布过滤，补加蒸馏水至1000mL。加入葡萄糖和琼脂，加热溶化，分装，121℃高压灭菌20min。
4.79.3 用途
分离培养霉菌。
4.80 马铃薯琼脂
4.80.1 成分
马铃薯(去皮切块) 200g
琼脂 20g
蒸馏水 1000mL
4.80.2 制法
同马铃薯葡萄糖琼脂。
4.80.3 用途
鉴定霉菌用。
4.81 孟加拉红培养基
4.81.1 成分
蛋白胨 5g
葡萄糖 10g
磷酸二氢钾 1g
硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.5g
琼脂 20g
1/3000孟加拉红溶液 100mL
蒸馏水 1000mL
氯霉素 0.1g
4.81.2 制法
上述各成分加入蒸馏水中溶解后，再加孟加拉红溶液。另用少量乙醇溶解氯霉素，加入培养基中，分装后，121℃灭菌20min。
4.81.3 用途
分离霉菌及酵母。
4.82 玉米粉琼脂
4.82.1 成分
玉米粉 60g
琼脂 15～18g
蒸馏水 1000mL
4.82.2 制法
将玉米粉加入蒸馏水中，搅匀，文火煮沸1h，纱布过滤，加琼脂后加热溶化，补足水量至1000mL。分装，121℃灭菌20min。
4.82.3 用途
鉴定假丝酵母及霉菌。
4.83 大米粉培养基
4.83.1 制法
将不含荧光物质的籼米挑去杂质和变质米粒，磨成粗粉，分装后121℃高压灭菌20min。
4.83.2 用途
霉菌产毒用。
4.84 亚硒酸盐煌绿增菌液
4.84.1 成分
蛋白胨 5g
酵母浸膏 5g
甘露醇 5g
牛磺胆酸钠 1g
20%亚硒酸氢钠溶液 20mL
0.25mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0) 100mL
2%煌绿溶液 0.25mL
蒸馏水 900mL
4.84.2 制法
4.84.2.1 将前面四种成分溶解于蒸馏水中。
4.84.2.2 校正pH，当用于干鸡蛋白样品时，pH8.2±0.1；用于其他干蛋品时，pH7.2±0.1；用于冰蛋品时pH7.0±0.1；121℃高压灭菌15min，放冷备用。
4.84.2.3 临用前加入灭菌的20%亚硒酸氢钠溶液及磷酸盐缓冲液，复查混合液的pH，必要时进行校正。
4.84.2.4 加入煌绿溶液定量分装于灭菌的烧瓶内，每瓶150mL，于1～5d内使用。
注：①20%亚硒酸氢钠溶液121℃高压灭菌15min。
②0.25mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0)配法：
磷酸氢二钾(无水) 21.8g
磷酸二氢钾(无水) 17.1g
蒸馏水 1000mL
121℃高压灭菌15min后备用。
4.85 煌绿肉汤增菌液
4.85.1 成分
肉浸液肉汤(或牛肉膏汤) 1000mL
磷酸氢二钾 1g
2%煌绿溶液 0.5～10mL
4.85.2 制法
4.85.2.1 将肉浸液肉汤加入磷酸氢二钾(原已有磷酸氢二钾者可不加)，校正pH，分装烧瓶，每瓶100mL，121℃高压灭菌20min。
4.85.2.2 2%煌绿水溶液于临用前配制。
4.85.2.3 按比例［见GB 4789.19—94《食品卫生微生物学检验蛋与蛋制品检验》］于肉汤内加入煌绿溶液，摇匀，备用。
注：①加入煌绿溶液时，肉汤温度不宜过高，一般以放冷为宜。
②煌绿的纯度不应低于93%。
4.86 0.1%蛋白胨水稀释剂
4.86.1 成分
蛋白胨 1g
蒸馏水 1000mL
4.86.2 制法
溶解蛋白胨于蒸馏水中，校正pH至7.0，121℃灭菌15min。
4.87 肠毒素产毒培养基
4.87.1 成分
蛋白胨 20g
胰消化酪蛋白 200mg(氨基酸)
氯化钠 5g
磷酸氢二钾 1g
磷酸二氢钾 1g
氯化钙 0.1g
硫酸镁 0.2g
芋酸 0.01g
蒸馏水 1000mL
琼脂 10～12g(固体透析培养用)
pH7.2～7.4
4.87.2 制法
除琼脂外将所有成分混于水中，溶解后调pH7.2～7.4，如用固体透析培养法再加入琼脂，121℃高压灭菌30min。
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