之前在学校实验课上做过乳鼠肾成纤维细胞的原代培养,现将实验流程总结出来以记录、分享。由于操作大部分在超净工作台上不便记录,故照片较少且截剪后较模糊。
(1)取材切割:将乳鼠肾脏置于PBS液后去除被膜,无菌PBS冲洗三次后剪成小块,再次用PBS液冲洗至组织发白去上清液,而后转移至离心管。
(2)消化:离心管中加入1mL0.25%胰蛋白酶,37℃消化20min,期间注意震荡。消化后静置去上清液。
(3)接种:取3mL含小牛血清的1640培养液,在离心管中混悬后加入培养瓶。
(4)培养:37℃培养三天(由于疫情实际上培养了5天)
(5)观察:使用倒置显微镜观察细胞