楼上要做几千块切片?开切片厂?为什么一次就需要两瓶?
多找几家试剂店,买一瓶肯定可以买到。
需要浓盐酸2瓶,现在购买比较麻烦啊 ,要到公安局申请才可以买。哪位可以卖给我2瓶啊??实验用,如下--------
预处理程序:
1. 将载玻片浸入2% 3-氨基丙基三乙氧基硅烷(3-aminopropyltriethoxysilane, Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) 丙酮溶液中5分钟,随后在丙酮及蒸馏水中漂洗,自然干燥载玻片。
2. 从福尔马林固定石蜡包埋的乳腺癌组织中获取多块4微米切片,分别置于以上经氨基烷基硅烷(aminoalkylsilane)处理过的载玻片上。
3. 将组织切片置于<chmetcnv wst="on" tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="65" unitname="℃">65℃</chmetcnv>下过夜烘烤。
4. 将组织切片浸于二甲苯中室温脱蜡2次,每次10分钟,随后浸入100%乙醇中5分钟。
5. 将组织切片依次室温置于100%乙醇、85%乙醇和70%乙醇中各两分钟复水。将组织切片室温浸入去离子水中3分钟,用无绒纸巾吸取多余的水分。
6. <chmetcnv wst="on" tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="50" unitname="℃">50℃</chmetcnv>下用30%[w/v] 酸性亚硫酸钠(sodium bisulfite )处理组织切片20-30分钟。
7. 于2XSSC溶液中漂洗2次,每次5分钟
8. 取0.4ml蛋白酶K储存液(20mg/ml)溶于40ml 20XSSC(pH 7.0)得到蛋白酶K工作液(200µg/ml);将组织切片浸泡在蛋白酶K工作液中,<chmetcnv wst="on" tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="37" unitname="℃">37℃</chmetcnv>下孵育20-30分钟。
9. 组织切片经蛋白酶K消化后,于2XSSC溶液中漂洗2次,每次5分钟。
10. 将组织切片置于<chmetcnv wst="on" tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue=".1" unitname="m">0.1M</chmetcnv> HCl中室温浸泡5-10分钟,于2XSSC溶液中漂洗2次,每次5分钟。
11. 将组织切片玻片依次置于<chmetcnv wst="on" tcsc="0" numbertype="1" negative="True" hasspace="False" sourcevalue="20" unitname="℃">-20℃</chmetcnv>预冷的70%乙醇、85%乙醇和100%乙醇中各2分钟脱水。
12. 将组织切片室温浸入丙酮溶液中2分钟。
13. 自然干燥玻片。
14. 加热玻片至<chmetcnv wst="on" tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="56" unitname="℃">56℃</chmetcnv>。
按照FISH操作步骤进行FISH实验。
时段 | 个数 |
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